鹅出血性多瘤病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

来源 :中国兽医科学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yancliu
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为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R2=0.975,其扩增效率E=86.731%,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×101copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10%~1.48%之间,组间变异系数在1.07%~2.24%之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%,其中阳性符合率为100%,总符合率为80%。上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义。
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