【摘 要】
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背景骨关节退行性改变压迫脊髓所致的脊髓型颈椎病（CSM）与脊髓急性损伤在病理特点及治疗策略方面存在差异，中医药治疗退行性CSM有着独特优势，临床应用广泛，但脊髓慢性压迫相关的治疗机制研究较少。目的研究益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓（C5~7）神经生长因子（NGF）、神经营养因子3（NT3）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的mRNA表达水平影响及NGF的蛋白表达和分布情况，探讨益肾养髓方促进
【机 构】
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背景骨关节退行性改变压迫脊髓所致的脊髓型颈椎病（CSM）与脊髓急性损伤在病理特点及治疗策略方面存在差异，中医药治疗退行性CSM有着独特优势，临床应用广泛，但脊髓慢性压迫相关的治疗机制研究较少。
目的研究益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓（C5~7）神经生长因子（NGF）、神经营养因子3（NT3）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的mRNA表达水平影响及NGF的蛋白表达和分布情况，探讨益肾养髓方促进CSM神经功能修复的作用机制。
方法2019年1月选取SPF级雌性SD大鼠96只，其中72只大鼠采用吸水膨胀材料聚乙烯醇丙烯酰胺互穿网络水凝胶（由北京师范大学化学学院提供）压迫脊髓的方法进行造模，余24只大鼠假手术（假手术组）。造模成功的大鼠随机分为模型组（n=24）、中药高浓度组（n=16）、中药中浓度组（n=16）、中药低浓度组（n=16）。中药灌胃的各组按照对应浓度进行灌胃（大鼠灌胃给药剂量采用体表面积系数换算系数6.3计算，高浓度为16.74 g·kg-1·d-1、中浓度为8.37 g·kg-1·d-1、低浓度为4.19 g·kg-1·d-1），药液浓缩后以1 ml/100 g体积灌胃给药，模型组及假手术组灌服等量（1 ml/100 g）0.9%氯化钠注射液，1次/d。分别于术后2、4、6、8、10周时，评价各组大鼠运动功能指数评分（BBB评分）；术后2、6、10周时，尼氏染色法观察大鼠脊髓前角正常神经元的尼氏体分布，实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测大鼠脊髓营养因子NGF、NT3、GDNF的mRNA表达水平、免疫组织化学分析NGF脊髓前角区蛋白表达及分布情况。
结果（1）术后2周，假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）；术后4周，假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）；术后6周，假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05），模型组BBB评分低于中药高浓度组（P<0.05），中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）；术后8周，假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05），模型组BBB评分低于中药高浓度组（P<0.05），中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）；术后10周，假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05），模型组BBB评分低于中药高、中浓度组（P<0.05），中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）。（2）术后2周，假手术组脊髓前角运动神经元形态正常，可见大量虎斑状尼氏体，丰富饱满；模型组脊髓前角神经元细小，形态为圆形，分布稀疏，胞内尼氏体溶解减少甚至消失；在术后6、10周时，中药高、中浓度组神经元虽有一定程度损伤，但细胞形态丰满、可见细胞内虎斑状尼氏体；中药低浓度组可见少量空泡，神经元细胞分布略稀疏，单个细胞内尼氏体数目比中药高、中浓度组含量少。术后2周，假手术组正常神经元数目多于模型组（P<0.05）。术后6周，假手术组正常神经元数目多于模型组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05），模型组正常神经元数目少于中药高浓度组（P<0.05），中药高浓度组正常神经元数目多于中药低浓度组（P<0.05）。术后10周，假手术组正常神经元数目多于模型组、中药低浓度组（P<0.05），模型组正常神经元数目少于中药高浓度组（P<0.05）。（3）术后6周，中药高浓度组NGF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药低浓度组（P<0.05），中药高浓度组NT3 mRNA表达水平高于模型组（P<0.05），中药高浓度组GDNF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药中、低浓度组（P<0.05）。（4）假手术组和模型组中脊髓前角的神经元细胞NGF染色程度较浅，分布稀疏，中药高、中浓度组大鼠的脊髓前角神经元NGF染色较明显，细胞形态完整。术后6周，中药高浓度组NGF平均积分光密度值高于假手术组和模型组（P<0.05）。
结论益肾养髓方可能通过增加脊髓中NGF、NT3、GDNF的mRNA表达水平，改善CSM大鼠的四肢运动功能，保护脊髓前角中正常运动神经元，从而达到促进神经修复的效果。
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