【摘 要】
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目的:重组腺病毒介导的表皮生长因子(recombinant adenovirus mediated epidermal growth factor,r Ad-EGF)质粒的构建,及体外转染人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell
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目的:重组腺病毒介导的表皮生长因子(recombinant adenovirus mediated epidermal growth factor,r Ad-EGF)质粒的构建,及体外转染人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)后对其增殖的影响。方法:采用目的载体PYr-adshuttle-1和EGF基因(PCR4-TOPO-EGF)构建PYr-ads-1-EGF,在体外重组到PAd/PL-DEST构建r Ad-EGF,并将其体外转染到h DPSCs。将h DPSCs分为3组:r Ad-EGF转染组(实验组)、r Ad-EGFP阴性对照组和空白对照组。当细胞密度达到70%时,用MOI=100的r Ad-EGF或r Ad-EGFP转染各组细胞,在37℃,5%CO2的条件下,用胰酶消化培养48 h后的各组细胞并收集,采用Western blotting检测转染后各组细胞EGF蛋白的表达,采用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果:经PCR鉴定,r AdEGF包装成功。在一定时间内,r Ad-EGF转染入h DPSCs,实验组h DPSCs的EGF蛋白表达水平显著高于其他两组(F=339.795,P<0.001),其细胞增殖能力明显升高(F=23.937,P<0.001)。结论 :r Ad-EGF质粒构建成功,r Ad-EGF转染h DPSCs后,其EGF蛋白明显升高,对其增殖具有促进作用。
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