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摘 要：本文采用高效液相法研究贮存环境对盐酸万古霉素原料的质量影响。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（284mm×4.6mm，5μm），三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相，检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。盐酸万古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。盐酸万古霉素平均回收率分别为98.9%。结论：本法简便、准确，可用于盐酸万古霉素原料的产品质量研究。
关键词：盐酸万古霉素原料；质量；研究
万古霉素是一种糖肽类抗生素。盐酸万古霉素为万古霉素盐酸盐。盐酸万古霉素用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其它细菌所致的感染：败血症、感染性心内膜炎、骨髓炎、关节炎、灼伤、手术创伤等[1-2]。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography＼HPLC）以液体为流动相，采用高压输液系统在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。本文采用高效液相法研究贮存环境对盐酸万古霉素原料的质量影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器：GW-UN超纯水器（北京普析通用仪器有限责任公司）；DOA-P504-BN无油隔膜真空泵（上海洽姆仪器科技有限公司）；LAB-UPF-10T分析型实验室专用纯水机（台上式）（四川兰博环保设备有限公司）；KQ-100KDB高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；GX-2050高温循环器（上海市百典仪器厂）；电子分析天平（上海魅宇仪器设备有限公司）；GI-3000-12二元高压梯度液相色谱仪（通用（深圳）仪器有限公司）；GENESYS 180紫外可见分光光度计（上海力晶科学仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（284mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：盐酸万古霉素购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（广州艾欣科学仪器有限公司）、三乙胺（广州艾欣科学仪器有限公司）、磷酸（广州艾欣科学仪器有限公司）、乙腈（滢宝科学仪器（上海）有限公司）、四氢呋喃（滢宝科学仪器（上海）有限公司）、磷酸氢二钠（广州艾欣科学仪器有限公司）、三乙胺（广州艾欣科学仪器有限公司）。
1.5 试药：盐酸万古霉素原料
2 測定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-6]。流动相：三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相，检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按盐酸万古霉素峰计算应不得低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸万古霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。
2.3 样品的制备
取本品，置容量瓶中，精密加入流动相20mL，超声处理5分钟，放冷并加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，按2.1项下的色谱条件，取续滤液10μl，注入液相色谱仪。
2.4 精密度试验
精密称取盐酸万古霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.5mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取盐酸万古霉素对照品85mg，置50ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4mL，置于5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，盐酸万古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的盐酸万古霉素原料样品6份，按测定方法项下的方法测定并计算样品的RSD值，结果RSD为0.88%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知纯度的原料9份，置量瓶中，分别精密加入盐酸万古霉素对照品，按项下方法制备成80%、100%、60%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.2%，RSD为0.86%。
2.8 样品稳定性试验
取同一批盐酸万古霉素原料样品，按2.3项下的方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、0.5、1.5、2小时，精密吸取供试品溶液10？滋l注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定盐酸万古霉素原料中盐酸万古霉素的RSD=0.82%。结果表明供试品2小时内稳定。
2.9 贮存环境
本文通过将盐酸万古霉素原料药分别进行常规包装、充高纯氮包装、充高纯氧包装，分别存放于2-8℃和40℃两种温度条件下，考察储存条件对质量的影响。
3 讨论
分别考察甲醇-水-三乙胺（18∶85：0.1）；三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（90∶9∶1）；0.01mol/L磷酸氢二钠-磷酸缓冲液（p H=2.2）-水（80：20）；三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相，不同比例的流动相，结果以三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相为流动相。本实验表明此方法可用于盐酸万古霉素原料中盐酸万古霉素的含量测定。本法操作简便，结果准确可靠，可用于本品中盐酸万古霉素的质量控制。实验结果表明盐酸万古霉素充氮包装后贮存在2-8℃可以大大抑制产品的降解。
参考文献
[1]汪波，蒋红，李秀清，熊辉，陈旭岩，谭伟.去甲万古霉素治疗耐甲氧西林葡萄球菌属感染的临床及细菌学评价[J].中国抗生素杂志，2001（03）.
[2]范洪伟，李华茵，焦力，许莹，曹彬，黄绍光，何礼贤，张杰，田丁，陈惠德，王爱霞.国产盐酸万古霉素治疗耐药G～+球菌感染的有效性和安全性临床研究[J].中国新药杂志，2010（05）.
[3]赵瑞柯，曹俊华.高效液相色谱法同时测定万古霉素和去甲万古霉素的血药浓度[J].海峡药学，2017（11）.
[4]陈唯，夏宗玲，陈荣，郁蕾蕾，邹素兰.高效液相色谱法测定人血清中盐酸去甲万古霉素含量[J].海峡药学，2009（12）.
[5]张敏，张远，杨勇，李刚，龙恩武，闫峻峰.国产与进口注射用万古霉素与两种溶媒的配伍研究[J].中国临床药理学杂志，2016（16）.
[6]戴智勇，李新中，尹桃，罗健.反相高效液相色谱法测定人血浆中万古霉素浓度[J].中国抗生素杂志，2002（10）.
关键词：盐酸万古霉素原料；质量；研究
万古霉素是一种糖肽类抗生素。盐酸万古霉素为万古霉素盐酸盐。盐酸万古霉素用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其它细菌所致的感染：败血症、感染性心内膜炎、骨髓炎、关节炎、灼伤、手术创伤等[1-2]。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography＼HPLC）以液体为流动相，采用高压输液系统在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。本文采用高效液相法研究贮存环境对盐酸万古霉素原料的质量影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器：GW-UN超纯水器（北京普析通用仪器有限责任公司）；DOA-P504-BN无油隔膜真空泵（上海洽姆仪器科技有限公司）；LAB-UPF-10T分析型实验室专用纯水机（台上式）（四川兰博环保设备有限公司）；KQ-100KDB高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；GX-2050高温循环器（上海市百典仪器厂）；电子分析天平（上海魅宇仪器设备有限公司）；GI-3000-12二元高压梯度液相色谱仪（通用（深圳）仪器有限公司）；GENESYS 180紫外可见分光光度计（上海力晶科学仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（284mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：盐酸万古霉素购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（广州艾欣科学仪器有限公司）、三乙胺（广州艾欣科学仪器有限公司）、磷酸（广州艾欣科学仪器有限公司）、乙腈（滢宝科学仪器（上海）有限公司）、四氢呋喃（滢宝科学仪器（上海）有限公司）、磷酸氢二钠（广州艾欣科学仪器有限公司）、三乙胺（广州艾欣科学仪器有限公司）。
1.5 试药：盐酸万古霉素原料
2 測定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-6]。流动相：三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相，检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按盐酸万古霉素峰计算应不得低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸万古霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。
2.3 样品的制备
取本品，置容量瓶中，精密加入流动相20mL，超声处理5分钟，放冷并加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，按2.1项下的色谱条件，取续滤液10μl，注入液相色谱仪。
2.4 精密度试验
精密称取盐酸万古霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.5mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取盐酸万古霉素对照品85mg，置50ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4mL，置于5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，盐酸万古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的盐酸万古霉素原料样品6份，按测定方法项下的方法测定并计算样品的RSD值，结果RSD为0.88%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知纯度的原料9份，置量瓶中，分别精密加入盐酸万古霉素对照品，按项下方法制备成80%、100%、60%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.2%，RSD为0.86%。
2.8 样品稳定性试验
取同一批盐酸万古霉素原料样品，按2.3项下的方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、0.5、1.5、2小时，精密吸取供试品溶液10？滋l注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定盐酸万古霉素原料中盐酸万古霉素的RSD=0.82%。结果表明供试品2小时内稳定。
2.9 贮存环境
本文通过将盐酸万古霉素原料药分别进行常规包装、充高纯氮包装、充高纯氧包装，分别存放于2-8℃和40℃两种温度条件下，考察储存条件对质量的影响。
3 讨论
分别考察甲醇-水-三乙胺（18∶85：0.1）；三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（90∶9∶1）；0.01mol/L磷酸氢二钠-磷酸缓冲液（p H=2.2）-水（80：20）；三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相，不同比例的流动相，结果以三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH值为3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1）为流动相为流动相。本实验表明此方法可用于盐酸万古霉素原料中盐酸万古霉素的含量测定。本法操作简便，结果准确可靠，可用于本品中盐酸万古霉素的质量控制。实验结果表明盐酸万古霉素充氮包装后贮存在2-8℃可以大大抑制产品的降解。
参考文献
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[2]范洪伟，李华茵，焦力，许莹，曹彬，黄绍光，何礼贤，张杰，田丁，陈惠德，王爱霞.国产盐酸万古霉素治疗耐药G～+球菌感染的有效性和安全性临床研究[J].中国新药杂志，2010（05）.
[3]赵瑞柯，曹俊华.高效液相色谱法同时测定万古霉素和去甲万古霉素的血药浓度[J].海峡药学，2017（11）.
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[5]张敏，张远，杨勇，李刚，龙恩武，闫峻峰.国产与进口注射用万古霉素与两种溶媒的配伍研究[J].中国临床药理学杂志，2016（16）.
[6]戴智勇，李新中，尹桃，罗健.反相高效液相色谱法测定人血浆中万古霉素浓度[J].中国抗生素杂志，2002（10）.