论文部分内容阅读
目的 研究过氧化氢(H2O2)对胰岛的损伤及内吗啡肽(EMs)对这种损伤的保护作用.方法 成年雄性Wistar大鼠18只,体质量200~300 g,体外分离、纯化和培养Wistar大鼠胰岛,双硫腙(DyTZ)染色鉴定,锥虫蓝染色检测细胞活力,葡萄糖刺激实验检测胰岛生物活性.四唑蓝(MTT)分析不同浓度的H2O2对胰岛的损伤;放射免疫法检测EMs对H2O2诱导的胰岛细胞胰岛素分泌量的影响;流式细胞技术检测EMs对H2O2诱导的细胞周期影响.Western blot检测EMs和H2O2对p21蛋白表达的影响.多组间均数比较采用方差分析.结果 胰岛获得率为95%±2%,活力为96%±3%,生物学功能正常.与对照组比较,H2O2处理组胰岛细胞胰岛素释放量降低[分别为(67±9)mU/L,(153±11)mU/L,P<0.01],而EMs+H2O2组胰岛素释放量与H2O2组相比增加[分别为(108±13)mU/L,(116±12)mU/L,P<0.05];H2O2处理组细胞周期G0/G1期细胞数目与对照组比较增多(分别为63.9%±3.1%,41.3%±1.9%,P<0.05);S期的细胞数目与对照组比较减少(分别为27.2%±1.1%、35.3%±2.6%,P<0.05);而用EM1预孵后与只加H2 O2处理的细胞比较,G0/G1期细胞数目减少(44.4%±2.1%,66.9%±3.1%,P<0.05),EM2预孵后再加H2O2处理的细胞与只加H2O2处理的细胞比较G0/G1期细胞数目减少(分别为47.6%±2.8%,66.9%±3.1%,P<0.05),EM1预孵后与只加H2O2处理的细胞比较S期的细胞数目增加(分别为32.1%±1.2%,24.2%±1.1%,P<0.05),EM2预孵后与只加H2O2处理的细胞比较S期的细胞数目增加(分别为31.2%±1.8%,24.2%±1.1%,P<0.05).H2O2处理组细胞p21蛋白表达增加(1.10±0.16,P<0.05),而EMs组细胞p21蛋白表达降低(分别为0.35±0.05,0.30±0.04,P<0.05).结论 内吗啡肽对过氧化氢诱导的胰岛损伤具有保护作用,其可能是通过降低p21蛋白表达和抗氧化损伤等机制实现的.