【摘 要】
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[目的]旨在筛选稳定可靠的瘤胃内容物微生物基因组DNA的提取方法,获得高质量瘤胃微生物基因组DNA,用于羔羊瘤胃内容物微生物多样性的研究.[方法]采用液氮研磨+珠磨+CTAB法、珠磨+CTAB法、液氮研磨+珠磨+ SDS+ GITC法和液氮研磨+CTAB+ SDS法4种方法提取羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA.通过DNA浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测和q-PCR对提取效果进行比较,分析各提取方法对羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA的影响.[结果]4种方法提取到的基因组DNA经q-PCR分析,瘤胃细菌和产甲烷
【机 构】
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兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州 730020;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州 730070
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[目的]旨在筛选稳定可靠的瘤胃内容物微生物基因组DNA的提取方法,获得高质量瘤胃微生物基因组DNA,用于羔羊瘤胃内容物微生物多样性的研究.[方法]采用液氮研磨+珠磨+CTAB法、珠磨+CTAB法、液氮研磨+珠磨+ SDS+ GITC法和液氮研磨+CTAB+ SDS法4种方法提取羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA.通过DNA浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测和q-PCR对提取效果进行比较,分析各提取方法对羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA的影响.[结果]4种方法提取到的基因组DNA经q-PCR分析,瘤胃细菌和产甲烷菌的数量存在显著差异(P＜0.001),其中琥珀酸拟杆菌(Fibrobacter succino genes)数量最高,总细菌(total bacteria)次之,白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)数量最少.液氮研磨+珠磨+SDS+ GITC法所获得的羔羊瘤胃内容物微生物DNA样品浓度和纯度较高;瘤胃细菌和产甲烷菌数量显著高于其他3种方法(P＜0.001).[结论]液氮研磨+珠磨+ SDS+ GITC法能够得到高质量的羔羊瘤胃内容物微生物基因组DNA,更适合于羔羊瘤胃内容物微生物分子生物学研究.
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