目的研究马尔尼菲青霉菌(PM)溶血磷脂酶(LysoPLs)基因的克隆、表达和纯化,为研究其致病机制奠定基础。方法采用生物信息学方法,从PM酵母相全长cDNA文库中识别出PMLysoPLs基因的同源序列及其全长编码区。通过PCR方法扩增PMLysoPLs基因的编码区序列,构建原核表达载体pET30a(+)-PMLysoPLs,经DNA序列测定鉴定其序列,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用His-镍蛋白纯化柱进行纯化。结果 PMLysoPLs基因长度为991bp,其全长编码序列长度为732bp,编码243个氨基酸,其编码蛋白理论分子量为26.8kDa。重组表达载体经序列测定及酶切鉴定与理论推测结果相符。经IPTG诱导,该基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中得到高效的可溶性上清表达,纯化后的重组蛋白分子量为25～35kDa,其单一蛋白纯度达95%以上。结论本研究成功构建了PMLysoPLs基因的pET30a(+)原核重组质粒,获得的可溶性重组蛋白表达效率高,可用于进一步研究PM溶血磷脂酶的功能。