用人肝细胞cDNA文库制备Dig-Fas探针

来源 :川北医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanqie
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为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段和PCR扩增试验分析鉴定 ,确证获阳性转化子。然后采用地高辛化学连接标记和查见方法 ,标记扩增、分离和纯化的FascDNA ,经斑点免疫实验证实获高滴度Dig -FascDNA探针 In order to explore the relationship between the occurrence and development of SLE and the expression of Fas, we cloned the T-easyasyctor from the human hepatocyte cDNA library by using the technique of falling PCR, molecular cloning and Fas-specific primers, Through the drug resistance and lacZ insert inactivation screening, rapid cell lysis method, restriction endonuclease digestion fragments and PCR amplification test analysis and identification, confirmed positive transformants. Then using digoxigenin-labeled and ligation method, labeled FascDNA amplification, isolation and purification, confirmed by the dot immunization was high-titer Dig-Fasc DNA probe
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