【摘 要】
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目的:构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达情况.方法:以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长
【机 构】
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山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所
【基金项目】
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山东省卫生厅资助项目;山东省自然科学基金;国家自然科学基金
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目的:构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达情况.方法:以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,T/A克隆至pCR2.1载体中.经酶切、测序鉴定后,将NKX3.1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中.将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 细胞,RT-PCR和Western blot法检测NKX3.1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达.结果:人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确. pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western blot证明在mRNA和蛋白水平均能有效表达NKX3.1.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1, 转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP后能有效表达.
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