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目的
建立M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法,评估该指标在特发性膜性肾病(IMN)中的检测价值。
方法以PLA2R抗原包板并对其进行Eu3+-链霉亲和素标记,建立PLA2R抗体的双抗原夹心TRFIA法。检测63例IMN患者(男36例、女27例,年龄25~75岁)和90例健康体检者(男30名、女60名,年龄22~53岁)血清中的PLA2R抗体含量。采用Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney u检验分析数据。
结果本方法灵敏度5 μg/L,线性测量范围0~10 mg/L,有效剂量(ED)20、ED50和ED80分别为(0.144±0.012)、(0.707±0.029)和(3.466±0.098) mg/L。批内和批间CV分别为4.7%和5.1%。健康体检者的血清PLA2R抗体水平为0.455(0.320, 0.593) mg/L,而IMN患者的血清PLA2R水平为2.690(0.717, 7.750) mg/L,较前者升高显著(z=-3.688,P<0.05);且血清PLA2R抗体水平在不同年龄组及不同病理分期患者间差异有统计学意义(χ2值:10.328和9.716,均P<0.05)。由受试者工作特征(ROC)曲线可知,以血清中PLA2R抗体的质量浓度0.80 mg/L为阈值时,PLA2R抗体检测诊断IMN的灵敏度为73.0%(46/63),特异性为95.6%(86/90)。
结论成功建立双抗原夹心测定人血清PLA2R抗体的TRFIA法,该法快速、简便,有助于提高对IMN患者的诊断准确性。