【摘 要】
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tbx2是早期心脏发育的关键基因.为进一步探究其对房室间隔(AVC)发育的影响,研究利用CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术,成功构建了斑马鱼tbx2b突变体.通过T7E1酶切对其Fo进行敲
【机 构】
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上海海洋大学科技部海洋生物科学国际联合研究中心 上海201306;上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室 上海201306;上海海洋大学国家水生动物病原库 上海201306
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tbx2是早期心脏发育的关键基因.为进一步探究其对房室间隔(AVC)发育的影响,研究利用CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术,成功构建了斑马鱼tbx2b突变体.通过T7E1酶切对其Fo进行敲除效率检测,结果显示平均敲除效率约为57.5％.F1进一步筛选获得tbx2b杂合突变体,测序结果显示突变类型为11 bp碱基缺失的移码突变.tbx2b杂合子内交获得纯合子,tbx2b纯合突变体在5 dpf死亡并出现早期心脏环化异常表型.斑马鱼整胚原位杂交实验显示在3 dpf tbx2b纯合突变体中,心脏腔室分化特异性标志基因nppa、nppb表达上调并畀位表达在AVC,而AVC发育关键基因has2的表达消失.高效构建tbx2b突变体并初探其对下游基因的影响,为后续深入研究tbx2b对心脏AVC发育的作用奠定了基础,同时加深了人们对早期心脏调控网络的认识.
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