【摘 要】
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目的 探讨Core 3 O-型糖链对大肠杆菌黏附和侵袭肠上皮细胞的影响.方法 通过慢病毒转染技术,获得β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶6(β3gnT6)稳定过表达的肠上皮细胞株(β3gnT6/HT-29和β3gnT6/LS174T)及其对照细胞株(Ctr/HT-29和Ctr/LS174T).上述细胞株与肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)共培养,采用细菌梯度稀释克隆计数和荧光显微镜直接观察法,计数黏附于细胞表面的细菌数;上述细胞株与侵袭性大肠杆菌(EIEC)共培养
【机 构】
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陆军军医大学第一附属医院消化内科,重庆 400038;陆军第九五八医院消化科,重庆 400020
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目的 探讨Core 3 O-型糖链对大肠杆菌黏附和侵袭肠上皮细胞的影响.方法 通过慢病毒转染技术,获得β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶6(β3gnT6)稳定过表达的肠上皮细胞株(β3gnT6/HT-29和β3gnT6/LS174T)及其对照细胞株(Ctr/HT-29和Ctr/LS174T).上述细胞株与肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)共培养,采用细菌梯度稀释克隆计数和荧光显微镜直接观察法,计数黏附于细胞表面的细菌数;上述细胞株与侵袭性大肠杆菌(EIEC)共培养2 h,通过庆大霉素杀灭黏附于细胞表面的细菌,再采用细菌梯度稀释克隆计数法,计数侵袭入细胞内细菌数.最后通过测定单层细胞跨膜电阻值(TEER),评价Core 3 O-型糖链对肠上皮细胞屏障功能的影响.结果 细菌克隆计数和荧光显微镜直接观察法均显示,黏附于β3gnT6/HT-29和β3gnT6/LS174T细胞株的EPEC和EHEC O157:H7少于其对照细胞(P<0.01或P<0.05);侵袭入β3gnT6/HT-29和β3gnT6/LS174T细胞株的EIEC高于其对照细胞(P<0.01或P<0.05);在EPEC或EHEC O157:H7感染条件下,不同时间点上均呈现出β3gnT6/HT-29和β3gnT6/LS174T细胞株的TEER下降值高于其对照细胞(P<0.01或P<0.05).结论 促进肠上皮细胞Core 3 O-型糖链表达将抑制大肠杆菌黏附于肠上皮细胞,同时对大肠杆菌侵袭易感.
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