探讨整合素β1基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖和分泌功能的影响。
方法原代培养正常及哮喘模型小鼠ASMC，分别取各自第5代ASMC进行实验，利用RNA干扰(RNAi)技术沉默ASMC的整合素β1基因，RT-PCR技术观察沉默前后ASMC整合素β1 mRNA表达水平变化，蛋白印迹检测沉默前后ASMC整合素β1蛋白含量变化；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测整合素β1基因沉默前后ASMC细胞增殖变化；流式细胞仪测定整合素β1基因沉默前后ASMC细胞周期分布及细胞凋亡率变化情况；ELISA检测整合素β1基因沉默前后ASMC分泌的白细胞介素(IL)-6及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的含量变化。
结果(1)哮喘PBS对照组RT-PCR显示整合素β1 mRNA(0.907±0.041)较正常PBS对照组(0.527±0.027)显著增高(t=24.632，P<0.05)，哮喘siRNA干预组(0.503±0.034)较哮喘PBS对照组明显减低(t=24.079，P<0.05)，正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.077，P>0.05)；(2)Western blot检测显示哮喘PBS对照组整合素β1蛋白表达(0.733±0.067)较正常PBS对照组(0.386±0.044)显著增高(t=13.622，P<0.05)，哮喘siRNA干预组(0.453±0.074)较哮喘PBS对照组显著减低(t=8.880，P<0.05)，正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.908，P>0.05)；(3)MTT实验显示3～5 d的吸光度(A)值哮喘PBS对照组较同期正常PBS对照组显著增强(均P<0.05)，哮喘siRNA干预组的A值较同期哮喘PBS对照组显著降低(均P<0.05)，正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(均P>0.05)；(4)哮喘PBS对照组ASMC处于增殖状态的S期＋G2/M期ASMC比例为[(49±4)%]，明显高于正常PBS对照组[(34±4)%](t=8.035，P<0.05)，哮喘siRNA干预组ASMC的S期＋G2/M期ASMC比例(42±7)%明显低于哮喘PBS对照组(t=2.212，P<0.05)，正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(t=0.699，P>0.05)；(5)哮喘PBS对照组的凋亡率[(3.9±1.4)%]较正常PBS对照组[(7.4±0.5)%]显著升高(t=7.465，P<0.05)，哮喘siRNA干预组凋亡率[(12.6±2.4)%]明显高于哮喘PBS对照组(t=9.839，P<0.05)，正常siRNA干预组凋亡率与正常PBS对照组相比差异无统计学意义(t=2.094，P>0.05)；(6)哮喘PBS对照组IL-6[(545±28)ng/L]、RANTES分泌值[(345±28)ng/L]高于正常PBS对照组[分别为(219±26)ng/L和(138±16)ng/L，均P<0.05]，哮喘siRNA干预组分泌量[分别为(348±26)ng/L和(250±24)ng/L]显著低于哮喘PBS对照组(t值分别为6.192和4.590，均P<0.05)，而正常siRNA干预组较正常PBS对照组差异无统计学意义(均P>0.05)。
结论靶向ASMC整合素β1基因沉默能抑制哮喘模型小鼠ASMC的增殖、降低分泌功能并促进ASMC凋亡。