【摘 要】
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目的:研究CPSF在真核表达载体上的克隆与瞬时表达.方法:以质粒pBS1761为模板扩增TAP-tag片段,PCR产物经纯化后克隆在真核表达载体pTRE2-hyg上.再以pUK-CPSF 30k、73k、100k为
【机 构】
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西安交通大学生命科学与技术学院,德国Halle大学生化研究所
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目的:研究CPSF在真核表达载体上的克隆与瞬时表达.方法:以质粒pBS1761为模板扩增TAP-tag片段,PCR产物经纯化后克隆在真核表达载体pTRE2-hyg上.再以pUK-CPSF 30k、73k、100k为模板扩增CPSF基因片段,将其克隆在质粒pTRE2-hyg-TAP-tag中TAP-tag片段的下游,并将重组质粒转化入细胞株Hela Tet-off S3细胞内.结果:细胞抽提液经SDS PAGE电泳后进行蛋白质印迹杂交,胶片上出现野生型的CPSF条带和分子量较大的滞后条带.后者经分子量与分子标记对照,确系重组体TAP-tag-CPSF所表达的蛋白条带.结论:重组质粒pTRE2hyg- TAP-tag-CPSF 30k,73k,100k在Hela Tet-off S3内完好表达.
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