【摘 要】
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旨在制备抗滑液支原体（MS）FolD的小分子单链抗体（ScFv），并对其活性进行鉴定。本研究从分泌抗FolD单克隆抗体杂交瘤细胞中提取总RNA，利用鼠源抗体前导肽和恒定区的通用引物，通过RT-PCR扩增得到抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），并利用短肽(Gly4Ser)3连接形成VH-linker-VL，将其插入到表达载体pBAD18-Cm中，转化至E.coli BL21（DE3），经0.
【基金项目】
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国家自然科学基金（32072863）；
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旨在制备抗滑液支原体（MS）FolD的小分子单链抗体（ScFv），并对其活性进行鉴定。本研究从分泌抗FolD单克隆抗体杂交瘤细胞中提取总RNA，利用鼠源抗体前导肽和恒定区的通用引物，通过RT-PCR扩增得到抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），并利用短肽(Gly4Ser)3连接形成VH-linker-VL，将其插入到表达载体pBAD18-Cm中，转化至E.coli BL21（DE3），经0.15%阿拉伯糖于16℃条件下诱导表达，并利用SDS-PAGE和Western blot分析表达结果，进而利用Western blot和间接ELISA检测ScFv的活性。结果显示，FolD单克隆抗体VH和VL基因大小分别为357 bp和333 bp，应用Linker拼接形成的VH-linker-VL基因大小为753 bp。SDS-PAGE和Western blot结果显示，ScFv在E.coli中以可溶性形式表达，其相对分子质量约为31 ku。Western blot和ELISA检测结果表明ScFv与抗原FolD有较好的结合活性。本研究成功获得了抗MS FolD的ScFv，为进一步优化ScFv的活性奠定了基础，也为后续研究MS快速检测方法提供生物学材料。
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