人LECs表达端粒酶活性,其活性改变与白内障的形成相关。研究证实,雌激素能增加人子宫内膜癌及乳腺癌细胞的端粒酶活性,从而发挥促进增生、抗凋亡作用,但能否增加人LECs中的端粒酶活性从而影响其生物学功能,国内外鲜见报道。
目的探讨β型雌二醇(β-E2)是否能增加人LECs端粒酶活性及其对人LECs增生和凋亡的影响。
方法体外培养并传代人LECs细胞系,先用1×10-6 mol/L β-E2分别作用人LECs 0、6、12、24和48 h,采用RT-PCR法确定增加人LECs中端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的最佳时间。将培养的人LECs细胞分为5个组,空白对照组细胞进行常规培养,溶剂对照组在培养液中添加体积分数0.1%乙醇,不同浓度β-E2组分别在培养液中添加1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2,继续培养细胞24 h,采用RT-PCR法检测各组人LECs中hHERT mRNA的相对表达量;采用端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测端粒酶活性;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞的增生值;采用Hoechst33258荧光染色法分析人LECs的凋亡情况。
结果1×10-6 mol/L β-E2浓度下能够增加人LECs中hTERT mRNA相对表达量的最佳作用时间为24 h。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组人LECs中hTERT mRNA的相对表达量分别为0.477±0.015、0.712±0.013和0.914±0.031,明显高于空白对照组的0.428±0.010及溶剂对照组的0.426±0.010,差异均有统计学意义(均P<0.05)。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组端粒酶活性值分别为0.711±0.015、0.941±0.010和1.249±0.047,明显高于空白对照组的0.535±0.013和溶剂对照组的0.543±0.013,差异均有统计学意义(均P=0.000)。1×10-8 mol/L β-E2组细胞的增生值(A值)明显高于1×10-7 mol/L β-E2组和1×10-6 mol/L β-E2组,差异均有统计学意义(均P=0.000),而1×10-7 mol/L β-E2组和1×10-6 mol/L β-E2组与空白对照组间细胞中的细胞增生值间差异均无统计学意义(P=0.718、0.856)。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组的细胞凋亡率均低于空白对照组和溶剂对照组(均P=0.000);空白对照组与溶剂对照组间比较差异无统计学意义(P=0.777)。人LECs增生值与hTERT mRNA相对表达量及端粒酶活性值间无明显直线相关关系(r=-0.299,P=0.278;r=-0.157,P=0.576)。人LECs凋亡率与hTERT mRNA相对表达量及端粒酶活性值间均呈明显负相关(r=-0.975,P=0.000;r=-0.981,P=0.000)。
结论β-E2能上调人LECs中的端粒酶活性,稍高浓度的β-E2可能通过增加人LECs的端粒酶活性而抑制细胞凋亡,但无促增生作用。