胰岛-脑1基因真核表达质粒的构建及鉴定

来源 :基础医学与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhi911

【摘要】

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目的构建并鉴定表达胰岛-脑1（Islet-Brain 1,IB1）基因的真核细胞表达质粒。方法从人胰岛细胞瘤提取总RNA,根据IB1 cDNA文库的序列利用RT-PCR扩增IB1基因。将此基因插入带有绿荧

【作者】

：

孙琦向若兰李玉秀王姮

【机构】

：

中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科,北京大学医学部生理与病理生理教研室

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2007年7期

【关键词】

：

胰岛-脑1基因真核表达载体转染 islet-brain 1 gene eukaryotic expression vector transfection

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目的构建并鉴定表达胰岛-脑1（Islet-Brain 1,IB1）基因的真核细胞表达质粒。方法从人胰岛细胞瘤提取总RNA,根据IB1 cDNA文库的序列利用RT-PCR扩增IB1基因。将此基因插入带有绿荧光的真核表达载体pEGFP-N1的EcoR1/KpnI酶切位点区域,携带IB1基因的真核表达质粒转染到胰岛细胞系（RINm5F）,最后通过G418筛选获得稳定的携带IB1基因的胰岛细胞系。利用倒置相差荧光显微镜、流式细胞仪、Western blot鉴定的质粒及转染的细胞系。结果RT-PCR扩增产物经琼脂糖

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