【摘 要】
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目的 建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因(VHL)突变的实验方法.方法 单个淋巴细胞基于多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR,结合各荧光的终点变化判断对应的等位基因存在与否.结果 MDA后单细胞扩增效率为90.91%,污染率为0;通过测序,患者VHL等位基因的脱
【机 构】
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200127,上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科,200127,上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科,200127,上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科,200127,上海交通大学医学院附属仁
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目的 建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因(VHL)突变的实验方法.方法 单个淋巴细胞基于多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR,结合各荧光的终点变化判断对应的等位基因存在与否.结果 MDA后单细胞扩增效率为90.91%,污染率为0;通过测序,患者VHL等位基因的脱扣率为26.67%,诊断正确率为73.33%;通过结合相应荧光的终点变化判断患者VHL基因的等位基因的脱扣率为16.67%,正确率为83.33%.结论 单细胞MDA后常规PCR后测序及实时荧光定量PCR能够特异、准确地检测单个淋巴细胞的VHL基因型,两者的联合应用有助于提高检测的准确性。
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