【摘 要】
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为研制鸡异质核糖核蛋白AB（hnRNPAB）单克隆抗体，为其生物学功能研究提供关键试剂，构建重组质粒pET-30a-hnRNPAB，转化感受态细胞E. coli BL21，经IPTG诱导表达，并通过树脂Ni对可溶性表达的鸡hnRNPAB蛋白进行亲和层析纯化之后免疫Balb/c小鼠，利用细胞融合技术建立抗鸡hnRNPAB的单克隆抗体细胞株，最终通过间接酶联免疫吸附试验（iELISA）筛选获得1 株单
【机 构】
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河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业农村部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（U21A20260）； 河南省重点研发与推广专项（212102110097）； 河南省自然科学基金面上项目（212300410359）； 河南省农业科学院自主创新项目（2022ZC65）；
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为研制鸡异质核糖核蛋白AB（hnRNPAB）单克隆抗体，为其生物学功能研究提供关键试剂，构建重组质粒pET-30a-hnRNPAB，转化感受态细胞E. coli BL21，经IPTG诱导表达，并通过树脂Ni对可溶性表达的鸡hnRNPAB蛋白进行亲和层析纯化之后免疫Balb/c小鼠，利用细胞融合技术建立抗鸡hnRNPAB的单克隆抗体细胞株，最终通过间接酶联免疫吸附试验（iELISA）筛选获得1 株单克隆抗体杂交瘤细胞株5H2-H1。间接免疫荧光试验（IFA）和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析表明，5H5-H1单克隆抗体可特异性识别鸡胚成纤维细胞（CEF）表达的hnRNPAB蛋白。同时IFA和间接免疫细胞化学试验（ICA）结果还显示，除了特异性识别鸡hnRNPAB蛋白之外，5H5-H1单克隆抗体还可以与来源自人、鼠、猴、牛或猪在内的5种常见哺乳动物细胞系表达的hnRNPAB发生特异性反应。
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