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【摘 要】目的：探讨Stathmin蛋白在鼻内翻性乳头状瘤（NIP）中的表达及其与临床病理之间的关系。方法：采用免疫组织化学法检测35例NIP和20例鼻中隔切口边缘粘膜组织（SM）以及10例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌（NSCC）标本中Stathmin蛋白的表达。结果：Stathmin 蛋白在 NIP 的阳性表达率为57.14% ，明显高于它在鼻中隔黏膜组织中的表达率0% ，两者差异有统计学意义 （ P<0.05 ） ； Stathmin蛋白在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中的阳性表达率为80% ，高于它在 NIP 的表达，差异具有统计学意义（ P<0.05） 结论：提示Stathmin 与肿瘤病理类型及肿瘤细胞分化程度有重要关联性。Stathmin 的阳性表达可能与 NIP 的侵袭性、高复发性有重要的相关性，在對 NIP 的诊断及检测中可能有重要作用。
【关键词】Stathmin；鼻内翻性乳头状瘤； 免疫组织化学
【中途分类号】R739.62 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0035—01
鼻内翻性乳头状瘤是临床上较多见的鼻腔鼻窦肿瘤。虽被定义为良性肿瘤但因其具有破坏性侵蚀生长、对周围组织造成极大损害，并且复发率高达28%一74%以及近5%—15%【1】的鼻内翻性乳头状瘤可发生恶变。因而在临床治疗上多采取较积极的态度，早期发现、早期预测其复发与恶变。Stathmin是一种微管不稳定蛋白，由于在细胞周期中具有特殊的微管解聚活性，作为信号转导分子在细胞分化、组织再生与修复、尤其在恶性肿瘤的发生发展及表型决定上具有重要作用及意义。S tatlmi in在人类多种恶性肿瘤中存在高表达，如乳腺癌、肺腺癌和口腔鳞状细胞癌等[2一4]。据报道，S tatlmi in8的高表达与一些恶性肿瘤分化和预后有关，被认为是肿瘤分化和预后的分子标志物[2一4]。本实验采用免疫组织化学方法检测Stathmin蛋白在鼻内翻性乳头状瘤组织中的表达。并对其在鼻内翻性乳头状瘤中的表达进行了分析研究。
1材料与方法
1.1资料
1.1.1研究对象：选取即墨中医医院病理科档案资料中2000-2011年间35例经病理确诊为鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（男21例，女14例，平均年龄52.2岁）的石蜡包埋标本作为实验组；另取2012年20例因鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术中所取鼻中隔切口边缘粘膜组织的石蜡包埋标本（男11例，女9例，平均年龄45岁）以及2000-2011年间经病理确诊并在耳鼻喉科科住院手术的鼻腔鼻窦鳞状细胞癌10例（男7例，女3例，平均年龄56. 3岁）作为对照组；作为对照组；所有患者均在耳鼻咽喉科住院治疗，病理检查之前除手术治疗之外，均未行放化疗、干扰素、免疫治疗等治疗措施，且未发现有其它系统恶性肿瘤。
1.1.2主要试剂与仪器：兔抗人Stathmin多克隆抗体（bs}902R）购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠抗人S tatlmi in单克隆抗体购白英国C ST公司。第二代通用型二步法检测系统（PV X000）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.2方法
1.2.1常规病理制片：所有标本均经10%福尔马林固定24-48小时，常规石蜡包埋，每例石蜡标本作4um厚连续切片4张（其中2张行Stathmin免疫组化染色，另2张分别供HE染色和空白对照），贴于涂有0. 05%多聚赖氨酸的载玻片，置于60 °C烤箱内烤干，备用。常规HE染色及免疫组化染色，按照试剂盒要求操作。
1.2.2染色结果判断：在400倍视野下，每例随机选不重复5个视野，根据阳性表达部位的染色强度和阳性表达的细胞数两种标准进行综合评分，（1）依据细胞阳性表达部位的染色强度判断：a.细胞无染色，记0分；b.细胞阳性表达部位染成黄色为弱阳性，记1分；c.细胞阳性表达部位染成棕黄色目_背景无着色，或细胞阳性表达部位染成棕色并有棕黄色背景为中等阳性，记2分；d.细胞阳性表达部位染成棕色目_背景无着色为强阳性，记3分，（2）依据阳性细胞表达数计分：a.无阳性细胞表达为0分；b.阳性表达细胞数}25%为1分；c. 25%<阳性表达细胞数<50%为2分；d.阳性表达细胞数）50%为3分，在有经验的病理科诊断医生指导下，分别按上述标准进行评分，再将两者评分结果相乘，其乘积为最终得分①0分者为阴性表达，最终得分为0分；②1分和2分者为弱阳性表达，最终得分为1分；③3分和4分者为中等阳性表达，最终得分为2分；④6分和9分者为强阳性表达，最终得分为3分，最终得分为0分和1分者记为阴性，2分和3分者记为阳性。
1.3统计学处理：采用SPSS 13. 0统计学软件，计量资料采用x（—）±s表示，两组患者计量资料的比较采用两独立样本t检验，计数资料的比较采用x2检验，P<0.05认为差异有统计学意义。
2结果
Stathmin 蛋白的阳性信号表达于细胞浆，按染色程度从黄色、棕黄色到棕色不等。在 NIP 中 stathmin 蛋白阳性产物大部分位于鳞状上皮、呼吸上皮或移行上皮细胞胞浆，基底细胞层阳性表达较少，阳性细胞分布以上皮层为主，向上皮各层逐渐分散 ； 在鼻中隔黏膜组织中部分切片阳性细胞表达呈棕黄色，染色较浅，阳性细胞数较少，密度稀，稀疏的阳性细胞分散于上皮的基底细胞层 ； 在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中阳性表达颜色较深，大部分呈棕色，部分为深棕色，密度高，阳性细胞数延伸到上皮的全层，分化差的表达无层次 。Stathmin 蛋白在 NIP 的阳性表达率为57.14% ，明显高于它在鼻中隔黏膜组织中的表达率0% ，两者差异有统计学意义 （ P<0.05 ） ； Stathmin蛋白在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中的阳性表达率为80% ，高于它在 NIP 的表达，差异具有统计学意义（ P<0.05） ，见表 1。 3 讨论
鼻内翻性乳头状瘤是鼻腔、鼻窦最常见的良性肿瘤之一。尽管鼻内翻性乳头状瘤属良性肿瘤，但其局部侵袭性生长以及高复发高恶变率的特殊生物学特性使其具有与一般良性肿瘤不同的特点[5]。因而临床上应给与高度的重视，同时也期待发现更好的方法改变其高复发高恶变率的特性。Stathmin 蛋白是新发现的一种微管不稳定蛋白，具有独特的微管解聚活性，通过微管系统的动力学平衡可以调控细胞周期，并因此改变细胞的增殖、分化、活性等生物学行为。在细胞增殖和分化及肿瘤发生中有重要的作用。近年研究证实，在多种恶性肿瘤中 Stathmin 都有高水平表达，在白血病、淋巴瘤、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌、成骨肉瘤、乳腺癌及消化系统恶性肿瘤等多种肿瘤中都检测到 Stathmin 的高表达。黄方等[6]研究发现，Stathmin 在儿童喉乳头状瘤组织中具有高表达，可能与其高复发性、难治性有关。本研究通过检测鼻腔内翻性乳头状瘤中 Stathmin 的表达情况，显示从鼻中隔粘膜一鼻腔内翻性乳头状瘤一鼻腔鳞癌，Stathmin 阳性细胞数逐渐增多，而且在三种组织类型之间差异有显著性，提示Stathmin 与肿瘤病理类型及肿瘤细胞分化程度有重要关联性。Stathmin 的阳性表达可能与 NIP 的侵袭性、高复发性有重要的相关性，在对 NIP 的诊断及检测中可能有重要作用。
参考文献：
[1] L Lesperan ce MM，E scalm ado RM.Sqquam ous cell care in cm aarising in vented pap illcm a.Laryngoscope1995，105（3）：178-183
[2] Brattsand G. Correlation of oncoprotein 18/Stathmin expression in human breastcancerwith established prognostic factors[J]. Br J Cancer， 2000， 83（3）： 311-318.
[3] 王德輝.鼻内翻性乳头状瘤的鼻内镜手术[J].中国医学文摘耳鼻咽喉科学，2006，21（3）：148- 150.
[4] WANG DH. Endoscopic surgery of nose inverting papilloma [J].Chinese News and Reviews Otolaryngology Journal， 2006， 21 （3）：148- 150. Chinese
[5] 黄方，朱金枝，黄建强，等. 微管不稳定蛋白（ Stathmin）与喉乳头瘤的相关性[J]. 山东大学学报： 医学版，2010，48（ 5） ： 142-146.
【关键词】Stathmin；鼻内翻性乳头状瘤； 免疫组织化学
【中途分类号】R739.62 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0035—01
鼻内翻性乳头状瘤是临床上较多见的鼻腔鼻窦肿瘤。虽被定义为良性肿瘤但因其具有破坏性侵蚀生长、对周围组织造成极大损害，并且复发率高达28%一74%以及近5%—15%【1】的鼻内翻性乳头状瘤可发生恶变。因而在临床治疗上多采取较积极的态度，早期发现、早期预测其复发与恶变。Stathmin是一种微管不稳定蛋白，由于在细胞周期中具有特殊的微管解聚活性，作为信号转导分子在细胞分化、组织再生与修复、尤其在恶性肿瘤的发生发展及表型决定上具有重要作用及意义。S tatlmi in在人类多种恶性肿瘤中存在高表达，如乳腺癌、肺腺癌和口腔鳞状细胞癌等[2一4]。据报道，S tatlmi in8的高表达与一些恶性肿瘤分化和预后有关，被认为是肿瘤分化和预后的分子标志物[2一4]。本实验采用免疫组织化学方法检测Stathmin蛋白在鼻内翻性乳头状瘤组织中的表达。并对其在鼻内翻性乳头状瘤中的表达进行了分析研究。
1材料与方法
1.1资料
1.1.1研究对象：选取即墨中医医院病理科档案资料中2000-2011年间35例经病理确诊为鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（男21例，女14例，平均年龄52.2岁）的石蜡包埋标本作为实验组；另取2012年20例因鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术中所取鼻中隔切口边缘粘膜组织的石蜡包埋标本（男11例，女9例，平均年龄45岁）以及2000-2011年间经病理确诊并在耳鼻喉科科住院手术的鼻腔鼻窦鳞状细胞癌10例（男7例，女3例，平均年龄56. 3岁）作为对照组；作为对照组；所有患者均在耳鼻咽喉科住院治疗，病理检查之前除手术治疗之外，均未行放化疗、干扰素、免疫治疗等治疗措施，且未发现有其它系统恶性肿瘤。
1.1.2主要试剂与仪器：兔抗人Stathmin多克隆抗体（bs}902R）购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠抗人S tatlmi in单克隆抗体购白英国C ST公司。第二代通用型二步法检测系统（PV X000）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.2方法
1.2.1常规病理制片：所有标本均经10%福尔马林固定24-48小时，常规石蜡包埋，每例石蜡标本作4um厚连续切片4张（其中2张行Stathmin免疫组化染色，另2张分别供HE染色和空白对照），贴于涂有0. 05%多聚赖氨酸的载玻片，置于60 °C烤箱内烤干，备用。常规HE染色及免疫组化染色，按照试剂盒要求操作。
1.2.2染色结果判断：在400倍视野下，每例随机选不重复5个视野，根据阳性表达部位的染色强度和阳性表达的细胞数两种标准进行综合评分，（1）依据细胞阳性表达部位的染色强度判断：a.细胞无染色，记0分；b.细胞阳性表达部位染成黄色为弱阳性，记1分；c.细胞阳性表达部位染成棕黄色目_背景无着色，或细胞阳性表达部位染成棕色并有棕黄色背景为中等阳性，记2分；d.细胞阳性表达部位染成棕色目_背景无着色为强阳性，记3分，（2）依据阳性细胞表达数计分：a.无阳性细胞表达为0分；b.阳性表达细胞数}25%为1分；c. 25%<阳性表达细胞数<50%为2分；d.阳性表达细胞数）50%为3分，在有经验的病理科诊断医生指导下，分别按上述标准进行评分，再将两者评分结果相乘，其乘积为最终得分①0分者为阴性表达，最终得分为0分；②1分和2分者为弱阳性表达，最终得分为1分；③3分和4分者为中等阳性表达，最终得分为2分；④6分和9分者为强阳性表达，最终得分为3分，最终得分为0分和1分者记为阴性，2分和3分者记为阳性。
1.3统计学处理：采用SPSS 13. 0统计学软件，计量资料采用x（—）±s表示，两组患者计量资料的比较采用两独立样本t检验，计数资料的比较采用x2检验，P<0.05认为差异有统计学意义。
2结果
Stathmin 蛋白的阳性信号表达于细胞浆，按染色程度从黄色、棕黄色到棕色不等。在 NIP 中 stathmin 蛋白阳性产物大部分位于鳞状上皮、呼吸上皮或移行上皮细胞胞浆，基底细胞层阳性表达较少，阳性细胞分布以上皮层为主，向上皮各层逐渐分散 ； 在鼻中隔黏膜组织中部分切片阳性细胞表达呈棕黄色，染色较浅，阳性细胞数较少，密度稀，稀疏的阳性细胞分散于上皮的基底细胞层 ； 在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中阳性表达颜色较深，大部分呈棕色，部分为深棕色，密度高，阳性细胞数延伸到上皮的全层，分化差的表达无层次 。Stathmin 蛋白在 NIP 的阳性表达率为57.14% ，明显高于它在鼻中隔黏膜组织中的表达率0% ，两者差异有统计学意义 （ P<0.05 ） ； Stathmin蛋白在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中的阳性表达率为80% ，高于它在 NIP 的表达，差异具有统计学意义（ P<0.05） ，见表 1。 3 讨论
鼻内翻性乳头状瘤是鼻腔、鼻窦最常见的良性肿瘤之一。尽管鼻内翻性乳头状瘤属良性肿瘤，但其局部侵袭性生长以及高复发高恶变率的特殊生物学特性使其具有与一般良性肿瘤不同的特点[5]。因而临床上应给与高度的重视，同时也期待发现更好的方法改变其高复发高恶变率的特性。Stathmin 蛋白是新发现的一种微管不稳定蛋白，具有独特的微管解聚活性，通过微管系统的动力学平衡可以调控细胞周期，并因此改变细胞的增殖、分化、活性等生物学行为。在细胞增殖和分化及肿瘤发生中有重要的作用。近年研究证实，在多种恶性肿瘤中 Stathmin 都有高水平表达，在白血病、淋巴瘤、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌、成骨肉瘤、乳腺癌及消化系统恶性肿瘤等多种肿瘤中都检测到 Stathmin 的高表达。黄方等[6]研究发现，Stathmin 在儿童喉乳头状瘤组织中具有高表达，可能与其高复发性、难治性有关。本研究通过检测鼻腔内翻性乳头状瘤中 Stathmin 的表达情况，显示从鼻中隔粘膜一鼻腔内翻性乳头状瘤一鼻腔鳞癌，Stathmin 阳性细胞数逐渐增多，而且在三种组织类型之间差异有显著性，提示Stathmin 与肿瘤病理类型及肿瘤细胞分化程度有重要关联性。Stathmin 的阳性表达可能与 NIP 的侵袭性、高复发性有重要的相关性，在对 NIP 的诊断及检测中可能有重要作用。
参考文献：
[1] L Lesperan ce MM，E scalm ado RM.Sqquam ous cell care in cm aarising in vented pap illcm a.Laryngoscope1995，105（3）：178-183
[2] Brattsand G. Correlation of oncoprotein 18/Stathmin expression in human breastcancerwith established prognostic factors[J]. Br J Cancer， 2000， 83（3）： 311-318.
[3] 王德輝.鼻内翻性乳头状瘤的鼻内镜手术[J].中国医学文摘耳鼻咽喉科学，2006，21（3）：148- 150.
[4] WANG DH. Endoscopic surgery of nose inverting papilloma [J].Chinese News and Reviews Otolaryngology Journal， 2006， 21 （3）：148- 150. Chinese
[5] 黄方，朱金枝，黄建强，等. 微管不稳定蛋白（ Stathmin）与喉乳头瘤的相关性[J]. 山东大学学报： 医学版，2010，48（ 5） ： 142-146.