【摘 要】
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【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤,拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊,细
【机 构】
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广州中医药大学基础医学院,广州中医药大学组织学与胚胎学教研室,
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【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤,拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊,细胞悬液接种于细胞外基质包被的培养板中,以体积分数1%胎牛血清的K-SFM培养液培养,次日换无血清培养液。剩余组织块剪碎铺展于培养瓶中,添加含血清的HG-DMEM培养基常规培养。取以上2种细胞进行免疫荧光鉴定。毛囊上皮细胞进行流式细胞仪检测。【结果】两步酶法分离得到的毛囊上皮细胞贴壁迅速,圆形或多角形,呈典型铺路石状。培养的组织块周围有长梭形细胞爬出,细胞有突起,并连接成网状。毛囊上皮细胞CK15、CK19、β1整合素表达阳性,以G1期细胞为主,占75.6%。毛囊结缔组织鞘细胞的层粘连蛋白、纤维连接蛋白、波形蛋白表达阳性。【结论】分离培养的细胞为毛囊干细胞和成纤维细胞,该方法得到的细胞贴壁快、均一性好、增殖能力强。
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