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【摘 要】 目的：考察复方仙草颗粒的急性毒性，评价复方仙草颗粒的安全性。方法：预实验：9只SPF级昆明种小白鼠，禁食12h，随机分为3组，每组各3只。第一组按照0.4mL/10g一次性灌胃给药，第二组按照0.4mL/10g 灌胃给药2次;第三组按照0.4mL/10g灌胃给药3次，24h后，观察小鼠死亡情况。正式实验：40只SPF级昆明种小白鼠，禁食12h，随机分为空白对照组雄性组、空白对照组雌性组、给药雄性组、给药雌性组4组，每组10只，给药组按照0.4mL/10g灌胃给药，在24h内分3次灌服。结果：预实验无实验小鼠死亡，正式实验小鼠均存活，无死亡;小鼠日给药最大量为80.4g/kg;以成人每天用量30g来算，小鼠的最大耐受倍数为134倍。结论：复方仙草颗粒临床用药安全，无明显毒性。
【关键词】 复方仙草颗粒;小鼠;急性毒性
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）7-0017-03
Abstract：Objective To observe the safety of compound xiancao granule by acute toxicity in mice.Methods Preliminary experiment：9 SPF kunming mice was fasting 12 h prior to the experiment.The mice were divided into 3 groups randomly，3 mice in each group.The groups were a administered respectively， the first group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for once， the second group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for twice， the third group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for 3 times.The mouse death was observed after 24 hours.Formal experiment：40 SPF kunming mice was fasting 12h prior to the experiment.The mice were divided into male blank control group， female blank control group， male administration group， female administration group，10 mice in each group.The administration group was administrated with compound xiancao granule in a dose of 0.4mL/10g for 3 times a day.Resultes No rats died in the preliminary experiment， all of 40 mice survived in the formal experiment.Maximum daily dose of mice is 80.4g/kg， the maximum endurance time is 280 of clinical dosage in human （30g for daily dose）.Conclusions The clinical adminsitration of compound xiancao granule is safe， it had no significant toxicity.
Keywords：Compound Xiancao Granule; Mice; Acute Toxicity
糖尿病肾病（ Diabetic Nephropathy，DN） 是指糖尿病微血管病变导致的肾小球硬化，又称糖尿病肾小球硬化症，是糖尿病的主要并发症之一，其起病隐匿，病程进展迅速，其患病率更是随着糖尿病患者人数的增长而逐年升高， 并成为导致终末期肾脏病的重要原因[1]。根据流行病学统计的研究，预计到2030年，世界范围内的糖尿病患者将达到大约3.66亿人，而糖尿病肾病患者将超过1亿人[2]。一但患者进入DN蛋白尿期，进行性发展到肾不可逆损害，最终导致终末期肾衰竭。因此，采用早期临床干预防治DN具有重要意义。复方仙草颗粒由八仙草、三七、薏苡仁、制大黄、黄芪、甘草等组成，为颗粒免煎剂，10g/包，每次1包，每日3次，具有健脾益肾、清热利湿、活血祛毒的的作用[3]。课题组前期临床研究发现，复方仙草颗粒在治疗慢性原发性肾小球疾病及慢性肾功能衰竭和早期糖尿病肾病方面具有良好的疗效[3-7]，并進行了质量标准研究[8]。为评价复方仙草颗粒的安全性，该实验进行急性毒性研究，通过观察小白鼠的急性毒性反应，初步评价复方仙草颗粒的口服用药安全性，为其安全性评价奠定基础。
1 实验样品与材料
1.1 样品 复方仙草颗粒免煎剂，由广西中医药大学附属瑞康医院生产，批号：20180202。
1.2 实验动物 SPF级昆明种小白鼠，体重18～22g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004，实验单位使用许可证号：SYXK（桂）2019-0001。动物分笼饲养、自由饮水，喂大小鼠维持饲料（北京科澳协力饲料有限公司），实验动物垫料为玉米芯颗粒（东方特斯特，邳州市小河科技发展有限公司）。动物室温度（24±2）℃，相对湿度50%～60%，照明时间随同自然变化。动物室按常规定期消毒。 1.3 仪器 电子称：型号T-2000（美国双杰兄弟有限公司）、超纯水制造系统（成都越纯科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 受试样品的制备 取100g复方仙草颗粒，加纯净水溶解后，配制到颗粒不能继续溶解，且刚好能通过灌胃针，配至150mL，浓度为0.67g/mL（为最大浓度），备用。
2.1.2 预实验情况 选取受试的SPF级昆明种小白鼠9只，禁食12h，随机分为3组，每组各3只。第一组按照0.4mL/10g一次性灌胃给药，第二组按照0.4mL/10g 24h内灌胃给药2次;第三组按照0.4mL/10g 24h内灌胃给药3次，1d后，观察小鼠死亡情况。1d后，动物均无死亡，动物饮食和活动正常。预实验结果显示，可以进行最大耐受量（maximum tolerated dose，MTD）实验。
2.1.3 MTD实验[8] 选取受试的SPF级昆明种小白鼠40只，雌雄各半，分成空白对照组雄性组、空白对照组雌性组、给药组雄性组、给药组雌性组4组。实验前禁食12h。实验时称取体重，动物体重18～22g，空白对照组灌服纯净水，给药组灌服受試药物，浓度为小白鼠能耐受的最大浓度0.67g/mL，每只小鼠给药体积均为0.4mL/10g 体重，在24h内分3次灌服，灌胃3h后给饲料，自由饮水。连续观察14d，每天1次，观察记录小鼠外观、行为活动、精神状态、摄食、饮水、排泄情况，是否有中毒症状及死亡情况，同时在第7天、第14天称量体重。
小鼠的最大耐受量倍数的计算方法如下[9]：
小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量20g×50000g成人每日用量
注：20g为小鼠平均体重，50000g为成人平均体重。
2.1.4 数据处理 使用SPSS.13.0软件进行统计分析，实验结果以（x±s）表示，行t检验，P<0.05表明差异具有统计学意义。
2.2 结果 MTD实验各组动物给药后均无死亡，给药后实验动物均饮食和活动正常，未出现任何中毒症状。连续观察14d ，未出现小鼠死亡。14d后称量小鼠体重后处死小鼠，解剖后，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各脏器均无异常。实验前后各组动物体重变化见表1。给药组动物体重在给药前、给药7d后、给药14d后，分别与空白对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结果表明，给药后复方仙草颗粒对小白鼠体质量增长无影响。
根据临床经验，复方仙草颗粒临床推荐人用剂量为每次10g，每天3次。复方仙草颗粒最大浓度为0.67g/mL，小鼠采用40mL/kg的给药体积，每天给药3次，则每只小鼠的耐药量1.608g/20g。结果经计算，小鼠日给药最大量为80.4g/kg。以成人每天用量30g来算，小鼠的最大耐受倍数为134倍[9]，和雌雄无关。
据《中药药理研究方法学》，小鼠的最大耐受量倍数以耐受人用量口服100倍以上安全，本实验结果表明，复方仙草颗粒对小鼠的最大耐受量倍数为134倍，且受试动物活动，饮食正常，未出现任何中毒症状，无动物死亡，提示复方仙草颗粒无明显毒副作用。
3 讨论
中草药毒性实验的目的，在于暴露药物固有毒性，了解毒性性质及程度，为临床安全提供有效的科学依据，也是研制新药的基本要求。中草药毒性实验根据给药时间的长短和观察目的的不同，可分为急性毒性实验，长期毒性实验和特殊毒性实验。急性毒性实验又分半数致死量（LD50）测定和最大耐受量测定两种。
据《中药药理研究方法学》，最大耐受量测定，即选用临床试验的给药途径，以动物能耐受的最大浓度，最大体积的药量单次或24h内2～3次给与动物，记录动物反应情况计算出总给药量，并推算出相当于临床用药量的倍数。复方仙草颗粒是中药制剂，毒性很小，无法测出LD50，所以选用最大耐受量的测定来观察动物对复方仙草颗粒的耐受量，测定出复方仙草颗粒能达到人用量的134倍，和雌雄无关。从而对复方仙草颗粒的安全性做出估计，为临床用药提供参考，也为进一步开展复方仙草颗粒药效学的研究提供科学依据。参考文献
[1]王倩，严美花，李平.糖尿病肾病中医证候的现代研究[J].世界中医药，2018，13（6）：1320-1324，1331.
[2]Reutens A T，Atkinstkins R C.Epidemiology of diabetic nephropathy[J].Contrib Nephrol，2011，170（1）：1-7.
[3]黄国东，陆世龙，庞宗然.复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病的影响研究[J].中国现代医学杂志，2016，26（24）：66-71.
[4]向少伟，何小萍，黄国东，等.复方仙草胶囊对难治性肾病综合征患者血清转化生长因子-β_1水平的影响[J].湖北中医杂志，2006（1）：11-13.
[5]何小萍，向少伟，蒙木荣.仙草汤治疗慢性肾功能衰竭30例[J].陕西中医，2002（4）：293-294.
[6]何小萍，蒙木荣，顾国龙，等.复方仙草胶囊治疗慢性原发性肾小球疾病的临床观察[J].中国中医基础医学杂志，2004（7）：48-49，51.
[7]黄国东，何小萍，向少伟， 等.清热利湿活血法治疗隐匿型IgA肾病的临床观察[J].吉林中医药，2007，27（10）：11-14.
[8] 黄国东，顾敬文，莫宇凤，等.复方仙草颗粒的资料标准研究[J].广西中医药，2019，42（5）：67-71.
[9] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：112-119.
（收稿日期：2020-01-02 编辑：程鹏飞）
【关键词】 复方仙草颗粒;小鼠;急性毒性
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）7-0017-03
Abstract：Objective To observe the safety of compound xiancao granule by acute toxicity in mice.Methods Preliminary experiment：9 SPF kunming mice was fasting 12 h prior to the experiment.The mice were divided into 3 groups randomly，3 mice in each group.The groups were a administered respectively， the first group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for once， the second group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for twice， the third group in a dose of 0.4mL/10g by intragastric administration for 3 times.The mouse death was observed after 24 hours.Formal experiment：40 SPF kunming mice was fasting 12h prior to the experiment.The mice were divided into male blank control group， female blank control group， male administration group， female administration group，10 mice in each group.The administration group was administrated with compound xiancao granule in a dose of 0.4mL/10g for 3 times a day.Resultes No rats died in the preliminary experiment， all of 40 mice survived in the formal experiment.Maximum daily dose of mice is 80.4g/kg， the maximum endurance time is 280 of clinical dosage in human （30g for daily dose）.Conclusions The clinical adminsitration of compound xiancao granule is safe， it had no significant toxicity.
Keywords：Compound Xiancao Granule; Mice; Acute Toxicity
糖尿病肾病（ Diabetic Nephropathy，DN） 是指糖尿病微血管病变导致的肾小球硬化，又称糖尿病肾小球硬化症，是糖尿病的主要并发症之一，其起病隐匿，病程进展迅速，其患病率更是随着糖尿病患者人数的增长而逐年升高， 并成为导致终末期肾脏病的重要原因[1]。根据流行病学统计的研究，预计到2030年，世界范围内的糖尿病患者将达到大约3.66亿人，而糖尿病肾病患者将超过1亿人[2]。一但患者进入DN蛋白尿期，进行性发展到肾不可逆损害，最终导致终末期肾衰竭。因此，采用早期临床干预防治DN具有重要意义。复方仙草颗粒由八仙草、三七、薏苡仁、制大黄、黄芪、甘草等组成，为颗粒免煎剂，10g/包，每次1包，每日3次，具有健脾益肾、清热利湿、活血祛毒的的作用[3]。课题组前期临床研究发现，复方仙草颗粒在治疗慢性原发性肾小球疾病及慢性肾功能衰竭和早期糖尿病肾病方面具有良好的疗效[3-7]，并進行了质量标准研究[8]。为评价复方仙草颗粒的安全性，该实验进行急性毒性研究，通过观察小白鼠的急性毒性反应，初步评价复方仙草颗粒的口服用药安全性，为其安全性评价奠定基础。
1 实验样品与材料
1.1 样品 复方仙草颗粒免煎剂，由广西中医药大学附属瑞康医院生产，批号：20180202。
1.2 实验动物 SPF级昆明种小白鼠，体重18～22g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004，实验单位使用许可证号：SYXK（桂）2019-0001。动物分笼饲养、自由饮水，喂大小鼠维持饲料（北京科澳协力饲料有限公司），实验动物垫料为玉米芯颗粒（东方特斯特，邳州市小河科技发展有限公司）。动物室温度（24±2）℃，相对湿度50%～60%，照明时间随同自然变化。动物室按常规定期消毒。 1.3 仪器 电子称：型号T-2000（美国双杰兄弟有限公司）、超纯水制造系统（成都越纯科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 受试样品的制备 取100g复方仙草颗粒，加纯净水溶解后，配制到颗粒不能继续溶解，且刚好能通过灌胃针，配至150mL，浓度为0.67g/mL（为最大浓度），备用。
2.1.2 预实验情况 选取受试的SPF级昆明种小白鼠9只，禁食12h，随机分为3组，每组各3只。第一组按照0.4mL/10g一次性灌胃给药，第二组按照0.4mL/10g 24h内灌胃给药2次;第三组按照0.4mL/10g 24h内灌胃给药3次，1d后，观察小鼠死亡情况。1d后，动物均无死亡，动物饮食和活动正常。预实验结果显示，可以进行最大耐受量（maximum tolerated dose，MTD）实验。
2.1.3 MTD实验[8] 选取受试的SPF级昆明种小白鼠40只，雌雄各半，分成空白对照组雄性组、空白对照组雌性组、给药组雄性组、给药组雌性组4组。实验前禁食12h。实验时称取体重，动物体重18～22g，空白对照组灌服纯净水，给药组灌服受試药物，浓度为小白鼠能耐受的最大浓度0.67g/mL，每只小鼠给药体积均为0.4mL/10g 体重，在24h内分3次灌服，灌胃3h后给饲料，自由饮水。连续观察14d，每天1次，观察记录小鼠外观、行为活动、精神状态、摄食、饮水、排泄情况，是否有中毒症状及死亡情况，同时在第7天、第14天称量体重。
小鼠的最大耐受量倍数的计算方法如下[9]：
小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量20g×50000g成人每日用量
注：20g为小鼠平均体重，50000g为成人平均体重。
2.1.4 数据处理 使用SPSS.13.0软件进行统计分析，实验结果以（x±s）表示，行t检验，P<0.05表明差异具有统计学意义。
2.2 结果 MTD实验各组动物给药后均无死亡，给药后实验动物均饮食和活动正常，未出现任何中毒症状。连续观察14d ，未出现小鼠死亡。14d后称量小鼠体重后处死小鼠，解剖后，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各脏器均无异常。实验前后各组动物体重变化见表1。给药组动物体重在给药前、给药7d后、给药14d后，分别与空白对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结果表明，给药后复方仙草颗粒对小白鼠体质量增长无影响。
根据临床经验，复方仙草颗粒临床推荐人用剂量为每次10g，每天3次。复方仙草颗粒最大浓度为0.67g/mL，小鼠采用40mL/kg的给药体积，每天给药3次，则每只小鼠的耐药量1.608g/20g。结果经计算，小鼠日给药最大量为80.4g/kg。以成人每天用量30g来算，小鼠的最大耐受倍数为134倍[9]，和雌雄无关。
据《中药药理研究方法学》，小鼠的最大耐受量倍数以耐受人用量口服100倍以上安全，本实验结果表明，复方仙草颗粒对小鼠的最大耐受量倍数为134倍，且受试动物活动，饮食正常，未出现任何中毒症状，无动物死亡，提示复方仙草颗粒无明显毒副作用。
3 讨论
中草药毒性实验的目的，在于暴露药物固有毒性，了解毒性性质及程度，为临床安全提供有效的科学依据，也是研制新药的基本要求。中草药毒性实验根据给药时间的长短和观察目的的不同，可分为急性毒性实验，长期毒性实验和特殊毒性实验。急性毒性实验又分半数致死量（LD50）测定和最大耐受量测定两种。
据《中药药理研究方法学》，最大耐受量测定，即选用临床试验的给药途径，以动物能耐受的最大浓度，最大体积的药量单次或24h内2～3次给与动物，记录动物反应情况计算出总给药量，并推算出相当于临床用药量的倍数。复方仙草颗粒是中药制剂，毒性很小，无法测出LD50，所以选用最大耐受量的测定来观察动物对复方仙草颗粒的耐受量，测定出复方仙草颗粒能达到人用量的134倍，和雌雄无关。从而对复方仙草颗粒的安全性做出估计，为临床用药提供参考，也为进一步开展复方仙草颗粒药效学的研究提供科学依据。参考文献
[1]王倩，严美花，李平.糖尿病肾病中医证候的现代研究[J].世界中医药，2018，13（6）：1320-1324，1331.
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[3]黄国东，陆世龙，庞宗然.复方仙草颗粒对早期糖尿病肾病的影响研究[J].中国现代医学杂志，2016，26（24）：66-71.
[4]向少伟，何小萍，黄国东，等.复方仙草胶囊对难治性肾病综合征患者血清转化生长因子-β_1水平的影响[J].湖北中医杂志，2006（1）：11-13.
[5]何小萍，向少伟，蒙木荣.仙草汤治疗慢性肾功能衰竭30例[J].陕西中医，2002（4）：293-294.
[6]何小萍，蒙木荣，顾国龙，等.复方仙草胶囊治疗慢性原发性肾小球疾病的临床观察[J].中国中医基础医学杂志，2004（7）：48-49，51.
[7]黄国东，何小萍，向少伟， 等.清热利湿活血法治疗隐匿型IgA肾病的临床观察[J].吉林中医药，2007，27（10）：11-14.
[8] 黄国东，顾敬文，莫宇凤，等.复方仙草颗粒的资料标准研究[J].广西中医药，2019，42（5）：67-71.
[9] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：112-119.
（收稿日期：2020-01-02 编辑：程鹏飞）