【摘 要】
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设计合成特异引物,扩增O型口蹄疫病毒(O/FMDV)P1-2A基因,将其克隆至T载体上,通过HindⅢ和NotⅠ双酶切P1-2A基因和真核转座载体pFastBacTMDual,构建重组转座质粒pFastBac-P12A
【机 构】
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云南省畜牧兽医科学院,云南省保山疫苗厂
【基金项目】
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云南省应用基础研究面上项目(2009CD138);国家公益性科研(农业)专项(201103008);云南省农业科技创新工程项目(2008LA019)
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设计合成特异引物,扩增O型口蹄疫病毒(O/FMDV)P1-2A基因,将其克隆至T载体上,通过HindⅢ和NotⅠ双酶切P1-2A基因和真核转座载体pFastBacTMDual,构建重组转座质粒pFastBac-P12A,再将pFastBac-P12A转化入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac,经重组筛选获得杆状病毒重组质粒Bacmid-P12A。将Bacmid-P12A质粒转染Sf9昆虫细胞,出现典型CPE。病变细胞经Dot blotting和SDS-PAGE检测和分析,结果表明,O/FMDV P1-2A蛋白在Sf9细胞中获得表达,为O型FMDV特异性蛋白。
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