【摘 要】
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目的 建立介导胶原糖基化Glcα1、2Galβ1修饰基因(GLT25D1)敲低小鼠模型,为研究其在肝脏疾病中的作用奠定基础.方法 基于Cre-loxp重组酶系统,采用胚胎干细胞线性打靶技术,获
【机 构】
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北京大学地坛医院教学医院消化科,北京,100015;首都医科大学附属北京地坛医院消化科,北京,100015;北京大学地坛医院教学医院中西医结合中心,北京,100015;首都医科大学附属北京地坛医院中西
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目的 建立介导胶原糖基化Glcα1、2Galβ1修饰基因(GLT25D1)敲低小鼠模型,为研究其在肝脏疾病中的作用奠定基础.方法 基于Cre-loxp重组酶系统,采用胚胎干细胞线性打靶技术,获得同源重组的干细胞,繁殖嵌合体,获得杂合子GLT25D1+/-小鼠.随后将GLT25D1+/-小鼠自交.通过PCR凝胶电泳技术对子代小鼠的基因型进行鉴定.采用Western blot技术检测GLT25D1在WT型小鼠(wild type,WT)和杂合子GLT25D1+/-小鼠各组织的表达.比较WT和GLT25D1+/-小鼠的生育情况、子代小鼠基因型比例及出生20天的体重差异.结果 GLT25D1+/-小鼠配笼繁殖的264只子代小鼠中,杂合子GLT25D1+/-小鼠152只,WT小鼠112只,无GLT25D1-/-小鼠.GLT25D1+/-小鼠数量和WT小鼠数量的比值低于孟德尔遗传定律的2:1(χ2=9.818,P=0.002).Western blot示GLT25D1蛋白在WT小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结等重要组织中均有表达,其中在肝、脾和肺中高表达,肾和淋巴结中度表达,心和脑弱表达,GLT25D1+/-小鼠各组织表达水平均低于WT型小鼠.WT和GLT25D1+/-小鼠在外观和行为上无显著差异,GLT25D1+/-小鼠出生后20天体重显著低于WT型小鼠(t=2.520,P=0.0177).GLT25D1+/-小鼠交配后平均每窝出生的鼠仔数目为4只,低于WT小鼠平均鼠仔数7只(t=-8.482,P<0.001).结论 GLT25D1基因敲低后会导致GLT25D1-/-胚胎致死,且影响部分GLT25D1+/-小鼠正常出生,GLT25D1+/-小鼠出生后20天体重减轻,繁殖能力下降.
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