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【摘要】 目的 建立HPLC法测定呋塞米片的含量。方法 采用HPLC法。以phenomenex C18 5u 250×4.6mm为色谱柱；流动相：甲醇-水-0.01mol/L磷酸盐缓冲液（60：35：5）；流速：1.0ml/min；检测波长：286nm。结果 呋塞米在3-14ug范围内线性关系良好，线性回归方程Y=56217X-10762（r=0.9995）；回收率平均值为98.5%，RSD为0.93%（n=9）。结论 该法操作简便，准确，可靠，适用于呋塞米片的质量研究。
【关键词】 HPLC法；呋塞米片；含量
呋塞米片主要成分为呋塞米，功能主治是水肿性疾病高血压，预防急性肾功能衰竭，用于各种原因导致肾脏血流灌注不足，高钾血症及高钙血症，稀释性低钠血症，抗利尿激素分泌过多症（SIADH），急性药物毒物中毒等。现行《中国药典》采用的是紫外分光光度法，专属性不强，本文采用HPLC法测定呋塞米片的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-20A紫外检测器，岛津SIL-20A自动进样器，CTO-10AS色谱工作站。JAC-300超声波清洗机。
呋塞米对照品（中国药品生物制品检定所），呋塞米片（市售品），甲醇为色谱纯，其他为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性实验 色谱柱phenomenex C18 5u 250×4.6mm；流动相：甲醇-水-0.01mol/L磷酸盐缓冲液（60：35：5）；流速：1.0ml/min；检测波长：286nm；进样量：20ul；柱温：30℃。理论板数按呋塞米计算不低于2000。
2.2 溶液制备 精密称取呋塞米对照品100.15mg，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成1mg/ml对照品贮备液。精密量取1ml，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密称取供试品（相当于呋塞米20mg），置100ml的量瓶中，加流动相适量，超声10分钟，加流动相稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.3 方法学考察 线性关系的考察：精密量取贮备液0.3，0.5，0.7，1.0，1，2，1.4ml，分别置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成标准曲线系列溶液。按上述色谱条件，各进样20ul，以进样浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程为：Y=56217X-10762（r=0.9995）结果表明，呋塞米在3-14ug范围内线性关系良好。
精密度实验：精密量取对照品溶液，重复进样5次，记录峰面积，结果RSD为0.66%（n=5）。
稳定性实验：取供试品溶液（批号2012 0311）分别于0，2，4，6及8h时依法测定，记录峰面积。结果呋塞米峰面积RSD为1.19%（n=5），表明供试品溶液在该体系下稳定。
重复性实验：取同一批供试品溶液（批号2012 0311）5份，依法测定峰面积。结果RSD为1.08%。
空白干扰试验：按溶液制备方法制备不含呋塞米的阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果在阴性对照溶液中，与呋塞米保留时间处无色谱峰出现。
加样回收率实验：精密量取9份已知含量的供试品（批号2012 0311）（相当于呋塞米15mg），各置9个100ml的量瓶中，分别精密加入对照品溶液（1mg/ml）3ml，5ml，7ml各3份，按上述供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定，记录峰面积，结果回收率平均值为98.5%，RSD为0.93%（n=9）。
供试品含量测定：取3批供试品，按供试品溶液制备方法制备供试液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液20ul，记录色谱峰峰面积，以外标法计算，测定呋塞米的含量。结果批号（2011 1205，2012 0311，2012 07 06）3批供试品呋塞米含量分别为93.7%，99.5%，95.1%。
3 讨 论
3.1 本实验分别采用不同的色谱条件进行研究，结果表明，以甲醇-水-0.01mol/L磷酸盐缓冲液（60：35：5）为流动相，末端吸收少，干扰少，具有快速，准确等特点。
3.2 本实验采用HPLC法，同紫外分光光度法比较，专属性更强，灵敏度更高，可作为控制该制剂质量的有效方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].化学工业出版社，2010：336.
[2] 陈庆伟，陈华锋.高效液相色谱法测定呋塞米片的含量[J].海峡药学，2006（02）.
【关键词】 HPLC法；呋塞米片；含量
呋塞米片主要成分为呋塞米，功能主治是水肿性疾病高血压，预防急性肾功能衰竭，用于各种原因导致肾脏血流灌注不足，高钾血症及高钙血症，稀释性低钠血症，抗利尿激素分泌过多症（SIADH），急性药物毒物中毒等。现行《中国药典》采用的是紫外分光光度法，专属性不强，本文采用HPLC法测定呋塞米片的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-20A紫外检测器，岛津SIL-20A自动进样器，CTO-10AS色谱工作站。JAC-300超声波清洗机。
呋塞米对照品（中国药品生物制品检定所），呋塞米片（市售品），甲醇为色谱纯，其他为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性实验 色谱柱phenomenex C18 5u 250×4.6mm；流动相：甲醇-水-0.01mol/L磷酸盐缓冲液（60：35：5）；流速：1.0ml/min；检测波长：286nm；进样量：20ul；柱温：30℃。理论板数按呋塞米计算不低于2000。
2.2 溶液制备 精密称取呋塞米对照品100.15mg，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成1mg/ml对照品贮备液。精密量取1ml，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密称取供试品（相当于呋塞米20mg），置100ml的量瓶中，加流动相适量，超声10分钟，加流动相稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.3 方法学考察 线性关系的考察：精密量取贮备液0.3，0.5，0.7，1.0，1，2，1.4ml，分别置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成标准曲线系列溶液。按上述色谱条件，各进样20ul，以进样浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程为：Y=56217X-10762（r=0.9995）结果表明，呋塞米在3-14ug范围内线性关系良好。
精密度实验：精密量取对照品溶液，重复进样5次，记录峰面积，结果RSD为0.66%（n=5）。
稳定性实验：取供试品溶液（批号2012 0311）分别于0，2，4，6及8h时依法测定，记录峰面积。结果呋塞米峰面积RSD为1.19%（n=5），表明供试品溶液在该体系下稳定。
重复性实验：取同一批供试品溶液（批号2012 0311）5份，依法测定峰面积。结果RSD为1.08%。
空白干扰试验：按溶液制备方法制备不含呋塞米的阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果在阴性对照溶液中，与呋塞米保留时间处无色谱峰出现。
加样回收率实验：精密量取9份已知含量的供试品（批号2012 0311）（相当于呋塞米15mg），各置9个100ml的量瓶中，分别精密加入对照品溶液（1mg/ml）3ml，5ml，7ml各3份，按上述供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定，记录峰面积，结果回收率平均值为98.5%，RSD为0.93%（n=9）。
供试品含量测定：取3批供试品，按供试品溶液制备方法制备供试液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液20ul，记录色谱峰峰面积，以外标法计算，测定呋塞米的含量。结果批号（2011 1205，2012 0311，2012 07 06）3批供试品呋塞米含量分别为93.7%，99.5%，95.1%。
3 讨 论
3.1 本实验分别采用不同的色谱条件进行研究，结果表明，以甲醇-水-0.01mol/L磷酸盐缓冲液（60：35：5）为流动相，末端吸收少，干扰少，具有快速，准确等特点。
3.2 本实验采用HPLC法，同紫外分光光度法比较，专属性更强，灵敏度更高，可作为控制该制剂质量的有效方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].化学工业出版社，2010：336.
[2] 陈庆伟，陈华锋.高效液相色谱法测定呋塞米片的含量[J].海峡药学，2006（02）.