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[摘要]目的：考察金银花注射液的体内抗菌药理作用。方法：通过给金黄色葡萄球菌感染小鼠、肺炎双球菌感染小鼠静脉注射、灌胃不同浓度金银花注射液，考察其体内抑菌作用。结果：金银花注射液能降低金黄色葡萄球菌感染小鼠、肺炎双球菌感染小鼠的死亡率，延长存活天数，同剂量组静脉注射作用强于灌胃给药。结论：金银花注射液具有体内抗菌作用。
[关键词]金银花注射液；金黄色葡萄球菌；肺炎双球菌；小鼠；药理作用
[中图分类号]R921+.2
[文献标识码]A
[文章编号]1672-5018（2017）01-009-02
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera iaponica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花；具有清热解毒，疏散风热的作用。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热m；含挥发油类、黄酮类、有机酸类和三萜皂苷类物质，其抗茵有效成分为绿原酸类化合物。金银花注射液为金银花经提取纯化而成，绿原酸含量高，本文通过体内抗菌试验，考察其抗菌作用。
1.材料与方法
1.1材料
金银花注射液，10ml/瓶，相当于生药材10g，自制；双黄连注射液，河南淅川制药集团有限公司；盐酸林可霉素，南京第三制药厂。
营养肉汤，上海中科昆虫生物技术开发有限公司；营养琼脂，江苏省病症控制中心微生物试剂厂；胃膜素，由江苏省中医院药理室提供。
临床分离金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌，由江苏省人民医院微生物室鉴定提供。
清洁级ICR小鼠，由南京医科大学提供。
孵箱，上海分析仪器厂；DKB-8A型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司。
1.2方法
1.2.1对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
1.2.1.1菌液制备
取临床分离金黄色葡萄球菌接种于营养肉汤培养基中，置37℃孵箱培养18h。取出，划线于血平板上（10%羊红细胞营养琼脂平板），37℃孵箱培养20h。取出，用6m15%的胃膜素（PH7.2）洗脱菌落，并用4ml生理盐水溶液将血平板冲洗干净，合并后吹打，使菌落分散并分别用生理盐水配成0.33ml/ml、0.20ml/ml、0.1lml/ml、0.06ml/ml浓度菌液备用。
1.2.1.2选择合适的菌液浓度
取清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g。随机为4组，每组1个浓度，腹腔注射金黄色葡萄球菌菌液，每鼠0.5ml，观察24、48、72h感染小鼠死亡数。结果4组感染小鼠死亡率分别为100%、90%、80%、30%。故实验选用0.1lml/ml浓度菌液。
1.2.1.3对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用试验
取18～22g清洁级ICR小鼠190只，随机分组，每组19只，雌雄兼用。（1）正常对照组：等量生理盐水（NS）10ml/kg；（2）模型组：等量NS 10ml/kg；（3）双黄连注射液组：10ml/kg；（4）盐酸林可霉素组：0.3g/kg；（5）金银花注射液I组：6.6g/kg（生药量）；（6）金银花注射液Ⅱ组：13.2 g/kg（生药量）；（7）金银花注射液Ⅲ组：26.4g/kg（生药量）；（8）金银花注射液Ⅳ组：6.6g/kg（生药量）；（9）金银花注射液V组：13.2g/kg（生药量）；（10）金银花注射液Ⅵ组：26.4g/kg（生药量）。以上（1）～（7）组小鼠均静脉注射给药，（8）～（10）组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg。各组每日给药1次，连续给药5日。第3日给药后1h，除空白对照组以外，其余各组均腹腔注射金黄色葡萄球菌培养液0.5ml/鼠（菌液浓度0.1 1ml/m1）。然后继续给药2日。观察各组动物7日内死亡情况。
1，2.2对肺炎双球菌感染小鼠的保护作用
1.2.2.1菌液制备
取临床分离肺炎双球菌接种人营养肉汤培养基中，置37℃孵箱培养18h。取出，划线于血平板上（1%羊红细胞营养琼脂平板），37℃孵箱培养24h，取出。用6ml5%的胃膜素（PH 7.2）洗脱菌落，并用4ml生理盐水溶液将血平板冲洗干净，合并后吹打，使菌落分散。用生理盐水配成lml/ml、0.5ml/ml、0.33ml/ml、0.25ml/ml浓度菌液备用。
1.2.2.2选择合适的菌液浓度
取清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g随机分组，每组1个浓度，腹腔注射肺炎双球菌菌液0.5ml/鼠，观察感染小鼠死亡数。结果感染小鼠死亡率分别为100.0%，100.0%，60.0%，30.0%。故实验选用0.45ml/ml浓度菌液（小鼠死亡率估计80一90%之间）。
1.2.2.3对肺炎双球菌感染小鼠死亡的保护作用试验
取18～22g清洁级ICR小鼠190只随机分组，每组19只，雌雄兼用。（1）正常对照组：等量Ns 10ml/kg；（2）型组：等量NS 10ml/kg；（3）双黄连注射液组：10ml/kg；（4）林可霉素组：0.3g/kg；（5）金银花注射液I组：6.6g/kg（生药量）；（6）金银花注射液Ⅱ组：13.2g/kg（生药量）；（7）金银花注射液Ⅲ组：26.4g/kg（生药量）；（8）金银花注射液Ⅳ组：6.6g/kg（生药量）；（9）金银花注射液V组：13.2g/kg（生药量）；（10）金银花注射液Ⅵ组：26.4g/kg（生药量）。以上（1）一（7）组小鼠均静脉注射给药，（8）～（10）组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg。各组每日给药1次，连续给药5日。第3日给药1小时后，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射肺炎双球菌培养液0.5ml/鼠（菌液浓度0.45ml/m1）。然后继续给药2日。观察各组动物7日内死亡情况。
2.结果
2.1对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
实验结果显示：金银花注射液三个剂量组静脉注射给药对金黄色葡萄球菌感染小鼠可降低其死亡率，13.2g/kg和26.4g/kg组可延长感染小鼠的存活天数，与模型组比较具有显著性差异（p<0.05，0.01），效果优于同剂量灌胃给药P 2.2对肺炎双球菌感染小鼠的保护作用
实验结果显示：金银花注射液三个剂量组静脉注射给药对肺炎双球菌感染小鼠均可降低其死亡率，延长存活天数，与模型组比较有显著差异（P 3.讨论
体内抗菌试验结果显示：金银花注射液6.6、13.2、26.4 g慨（生药量）三个剂量组静脉注射及灌胃给药，以静脉注射效果较好，可降低金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌感染小鼠的死亡率，延长感染小鼠的存活天數。表明金银花注射液体内给药具有较好的抗金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌的作用。
[关键词]金银花注射液；金黄色葡萄球菌；肺炎双球菌；小鼠；药理作用
[中图分类号]R921+.2
[文献标识码]A
[文章编号]1672-5018（2017）01-009-02
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera iaponica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花；具有清热解毒，疏散风热的作用。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热m；含挥发油类、黄酮类、有机酸类和三萜皂苷类物质，其抗茵有效成分为绿原酸类化合物。金银花注射液为金银花经提取纯化而成，绿原酸含量高，本文通过体内抗菌试验，考察其抗菌作用。
1.材料与方法
1.1材料
金银花注射液，10ml/瓶，相当于生药材10g，自制；双黄连注射液，河南淅川制药集团有限公司；盐酸林可霉素，南京第三制药厂。
营养肉汤，上海中科昆虫生物技术开发有限公司；营养琼脂，江苏省病症控制中心微生物试剂厂；胃膜素，由江苏省中医院药理室提供。
临床分离金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌，由江苏省人民医院微生物室鉴定提供。
清洁级ICR小鼠，由南京医科大学提供。
孵箱，上海分析仪器厂；DKB-8A型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司。
1.2方法
1.2.1对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
1.2.1.1菌液制备
取临床分离金黄色葡萄球菌接种于营养肉汤培养基中，置37℃孵箱培养18h。取出，划线于血平板上（10%羊红细胞营养琼脂平板），37℃孵箱培养20h。取出，用6m15%的胃膜素（PH7.2）洗脱菌落，并用4ml生理盐水溶液将血平板冲洗干净，合并后吹打，使菌落分散并分别用生理盐水配成0.33ml/ml、0.20ml/ml、0.1lml/ml、0.06ml/ml浓度菌液备用。
1.2.1.2选择合适的菌液浓度
取清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g。随机为4组，每组1个浓度，腹腔注射金黄色葡萄球菌菌液，每鼠0.5ml，观察24、48、72h感染小鼠死亡数。结果4组感染小鼠死亡率分别为100%、90%、80%、30%。故实验选用0.1lml/ml浓度菌液。
1.2.1.3对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用试验
取18～22g清洁级ICR小鼠190只，随机分组，每组19只，雌雄兼用。（1）正常对照组：等量生理盐水（NS）10ml/kg；（2）模型组：等量NS 10ml/kg；（3）双黄连注射液组：10ml/kg；（4）盐酸林可霉素组：0.3g/kg；（5）金银花注射液I组：6.6g/kg（生药量）；（6）金银花注射液Ⅱ组：13.2 g/kg（生药量）；（7）金银花注射液Ⅲ组：26.4g/kg（生药量）；（8）金银花注射液Ⅳ组：6.6g/kg（生药量）；（9）金银花注射液V组：13.2g/kg（生药量）；（10）金银花注射液Ⅵ组：26.4g/kg（生药量）。以上（1）～（7）组小鼠均静脉注射给药，（8）～（10）组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg。各组每日给药1次，连续给药5日。第3日给药后1h，除空白对照组以外，其余各组均腹腔注射金黄色葡萄球菌培养液0.5ml/鼠（菌液浓度0.1 1ml/m1）。然后继续给药2日。观察各组动物7日内死亡情况。
1，2.2对肺炎双球菌感染小鼠的保护作用
1.2.2.1菌液制备
取临床分离肺炎双球菌接种人营养肉汤培养基中，置37℃孵箱培养18h。取出，划线于血平板上（1%羊红细胞营养琼脂平板），37℃孵箱培养24h，取出。用6ml5%的胃膜素（PH 7.2）洗脱菌落，并用4ml生理盐水溶液将血平板冲洗干净，合并后吹打，使菌落分散。用生理盐水配成lml/ml、0.5ml/ml、0.33ml/ml、0.25ml/ml浓度菌液备用。
1.2.2.2选择合适的菌液浓度
取清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g随机分组，每组1个浓度，腹腔注射肺炎双球菌菌液0.5ml/鼠，观察感染小鼠死亡数。结果感染小鼠死亡率分别为100.0%，100.0%，60.0%，30.0%。故实验选用0.45ml/ml浓度菌液（小鼠死亡率估计80一90%之间）。
1.2.2.3对肺炎双球菌感染小鼠死亡的保护作用试验
取18～22g清洁级ICR小鼠190只随机分组，每组19只，雌雄兼用。（1）正常对照组：等量Ns 10ml/kg；（2）型组：等量NS 10ml/kg；（3）双黄连注射液组：10ml/kg；（4）林可霉素组：0.3g/kg；（5）金银花注射液I组：6.6g/kg（生药量）；（6）金银花注射液Ⅱ组：13.2g/kg（生药量）；（7）金银花注射液Ⅲ组：26.4g/kg（生药量）；（8）金银花注射液Ⅳ组：6.6g/kg（生药量）；（9）金银花注射液V组：13.2g/kg（生药量）；（10）金银花注射液Ⅵ组：26.4g/kg（生药量）。以上（1）一（7）组小鼠均静脉注射给药，（8）～（10）组小鼠均灌胃给药，给药容量10ml/kg。各组每日给药1次，连续给药5日。第3日给药1小时后，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射肺炎双球菌培养液0.5ml/鼠（菌液浓度0.45ml/m1）。然后继续给药2日。观察各组动物7日内死亡情况。
2.结果
2.1对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
实验结果显示：金银花注射液三个剂量组静脉注射给药对金黄色葡萄球菌感染小鼠可降低其死亡率，13.2g/kg和26.4g/kg组可延长感染小鼠的存活天数，与模型组比较具有显著性差异（p<0.05，0.01），效果优于同剂量灌胃给药P
实验结果显示：金银花注射液三个剂量组静脉注射给药对肺炎双球菌感染小鼠均可降低其死亡率，延长存活天数，与模型组比较有显著差异（P
体内抗菌试验结果显示：金银花注射液6.6、13.2、26.4 g慨（生药量）三个剂量组静脉注射及灌胃给药，以静脉注射效果较好，可降低金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌感染小鼠的死亡率，延长感染小鼠的存活天數。表明金银花注射液体内给药具有较好的抗金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌的作用。