古樟ISSR扩增条件的优化

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采用改良CTAB法提取古樟叶片基因组DNA。利用单因素试验设计,对反应体系中退火温度、模板DNA含量、Mg^2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、ZaqDNA聚合酶用量、去离子甲酰胺等7种因素不同梯度对扩增结果的影响进行了比较分析。结果表明:古樟ISSR-PCR最佳反应体系为,在20μLPCR反应体积中,含50ngDNA模板,2.5mmol/LMgCl2,0.20mmol/LdNTPS,1UTaqDNA聚合酶,0.5μmol/L引物浓度,2%去离子甲酰胺。该反应体系的建立为今后利用ISSR分子技术对古樟的遗传
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