【摘 要】
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目的:探讨人肝素酶(HPSE)对肝癌细胞粘附、侵袭能力的影响。方法:RT-PCR、Westernblot检测人肝癌细胞系BEL-7402、HepG2、HCCLM3中HPSE的表达。构建4个HPSE的miR载体pcDNATM6
【机 构】
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安徽省芜湖市皖南医学院附属弋矶山医院肝胆一科
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(编号:81272412)资助~~
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目的:探讨人肝素酶(HPSE)对肝癌细胞粘附、侵袭能力的影响。方法:RT-PCR、Westernblot检测人肝癌细胞系BEL-7402、HepG2、HCCLM3中HPSE的表达。构建4个HPSE的miR载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-HPSE(pcDNA-miR-HPSE)和表达载体pIRES2-EGFP-HPSE;分别转染HPSE高表达和低表达细胞。荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和Western blot检测转染细胞HPSE表达;酶标仪检测细胞粘附能力,Transwell小室检测侵袭转移能力。结果:HPSE mRNA和蛋白在在3种肝癌细胞中相对表达量均高于正常肝细胞(P<0.05),以HCCLM3表达最高,HepG2最低(P<0.05);4种miR载体和表达载体鉴定符合要求;转染效率75%~85%;miR载体均能抑制HCCLM3细胞HPSE表达,以pcDNA-miR-HPSE-1抑制效果最佳(P<0.01);表达载体可提高HepG2细胞HPSE表达(P<0.05);HCCLM3细胞转染pcDNA-miR-HPSE-1后,粘附率、侵袭和迁移细胞数均下降约50%(P<0.01);HepG2细胞转染pIRES2-EGFP-HPS后上述各指标分别升高近40%(P<0.05)。结论:不同性质的HPSE载体可对肝癌细胞粘附和侵袭转移能力进行双向调节;HPSE不但参与肝癌细胞侵袭转移,亦可能与肝癌细胞粘附有关。
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