【摘 要】
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目的探讨微小RNA-487a-3p(miR-487a-3p)是否通过抑制其靶基因TM4SF1的表达影响肾癌细胞的增殖和侵袭。方法采用LipofectamineTM 2000转染miR-487a-3p模拟物或miR-NC至肾癌细胞ACHN，分为实验组和对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测转染后miR-487a-3p的表达量，流式细胞术检测细胞周期进展情况，四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测
【机 构】
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鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）泌尿外科 435000；鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室 435000,鄂东医疗集团黄石市中心医院
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目的探讨微小RNA-487a-3p(miR-487a-3p)是否通过抑制其靶基因TM4SF1的表达影响肾癌细胞的增殖和侵袭。
方法采用LipofectamineTM 2000转染miR-487a-3p模拟物或miR-NC至肾癌细胞ACHN，分为实验组和对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测转染后miR-487a-3p的表达量，流式细胞术检测细胞周期进展情况，四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖活性，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。构建TM4SF1野生型(WT)和突变型(Mut)的3’非编码区(3’UTR)-荧光素酶报告载体，通过双荧光素酶报告基因系统检测miR-487a-3p对TM4SF1基因野生型和突变型3’UTR荧光素酶活性的影响，并通过qPCR和Western blot检测转染两组细胞中TM4SF1基因mRNA及蛋白表达量的变化。
结果实验组和对照组ACHN细胞中miR-487a-3p的表达量分别为(33.12±3.35)和(1.04±0.18)，差异有统计学意义(t＝9.553，P<0.001)。实验组ACHN细胞周期在G0-G1期的细胞比例(58.42±2.15)较对照组(42.07±1.62)明显升高，差异有统计学意义(t＝6.087，P＝0.001)。实验组ACHN细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05)。实验组ACHN细胞侵袭数(114.70±20.38)较对照组(269.30±18.12)明显降低，差异有统计学意义(t＝5.670，P＝0.001)。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因检测实验结果表明TM4SF1是miR-487a-3p的靶基因(P<0.01)，实验组ACHN细胞中TM4SF1 mRNA的表达量(0.47±0.08)较对照组(1.02±0.10)明显降低，差异有统计学意义(t＝4.122，P＝0.006)，实验组ACHN细胞中TM4SF1蛋白表达较对照组明显降低。
结论miR-487a-3p可通过抑制其靶基因TM4SF1的表达，抑制肾癌细胞ACHN的增殖和侵袭，有望未来成为肾癌治疗的重要靶点。
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