【摘 要】
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目的:构建带编码HA标签的hdac1基因真核表达载体,研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对雌激素受体α和β(ERα和ERβ)蛋白水平的影响.方法:用提取的RNA产物进行逆转录合成cDNA,利
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;郑州大学基础医学院,郑州,450052
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目的:构建带编码HA标签的hdac1基因真核表达载体,研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对雌激素受体α和β(ERα和ERβ)蛋白水平的影响.方法:用提取的RNA产物进行逆转录合成cDNA,利用PCR技术扩增出hdac1基因完整编码区序列,通过DNA重组技术构建含编码hdac1DNA片段的真核表达载体pcDNA3-HA-hdac1;利用GST沉降(pull-down)实验观察HDAC1是否能特异结合ERα或ERβ;又将pcDNA3-HA-hdac1重组质粒分别和ERα表达载体或ERβ表达载体质粒共转染293T细胞,观察HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的影响.结果:转染pcDNA3-HA-hdac1重组质粒的哺乳动物细胞表达了与预期相对分子质量大小一致的HDAC1蛋白;GST沉降实验表明,HDAC1蛋白与ERα和ERβ均结合;共转染实验观察到HDAC1可使ERα蛋白水平降低,而对ERβ没有影响.结论:HDAC1与ERα和ERβ均结合,但其对ERs的作用具有亚型特异性,ERα和ERβ蛋白水平可能受不同类型的组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的调控.
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