【摘 要】
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目的探讨CCM3基因缺陷对醋酸铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性的影响。方法将C57雌鼠与CCM3基因敲除小鼠杂合雄鼠合笼后，取孕13.5 d的胎鼠，原代分离培养胚胎成纤维细胞。基因分型后，野生型和CCM3基因缺陷型细胞分别给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μmol/L醋酸铅处理，用MTS法检测细胞活性，并根据实验结果，选择6.25、25.00、100.0
【机 构】
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510080 广州，中山大学公共卫生学院卫生预防医学系,510080 广州，中山大学公共卫生学院卫生预防医学系,广东省职业病防治院检验科,510080 广州，中山大学公共卫生学院卫生预防医学系,510
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目的探讨CCM3基因缺陷对醋酸铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性的影响。
方法将C57雌鼠与CCM3基因敲除小鼠杂合雄鼠合笼后，取孕13.5 d的胎鼠，原代分离培养胚胎成纤维细胞。基因分型后，野生型和CCM3基因缺陷型细胞分别给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μmol/L醋酸铅处理，用MTS法检测细胞活性，并根据实验结果，选择6.25、25.00、100.00 μmol/L醋酸铅染毒，用双核阻滞法检测遗传毒性，用Western blot法检测相关基因的蛋白表达情况。
结果小鼠胚胎成纤维细胞经醋酸铅处理24 h后，野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(69.16±1.36)与对照组(100.00±2.33)相比，细胞活性下降了30%，杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(87.16±5.50)与对照组(100±2.06)相比，细胞活性下降了13%，差异有统计学意义(F野生型＝98.59，F杂合型＝82.63, P值均<0.001)。经醋酸铅处理48 h后，野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(51.99±5.62)与对照组(100.00±3.11)相比，细胞活性下降了50%，杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(66.33±4.06)与对照组(100.00±5.72)相比，细胞活性下降了35%，差异均有统计学意义(F野生型＝82.63，F杂合型＝36.86，P值均<0.001)。双核微核实验结果显示，随着染毒剂量增加，两种基因型细胞的核分裂指数逐渐下降，双核细胞微核率呈逐渐升高趋势，野生型细胞对照组、6.25、25.00、100.00 μmol/L剂量组的双核微核细胞率分别为29.6±2.2、47.3±6.6、55.5±9.1、66.8±3.5(/1 000)；杂合型细胞的双核微核细胞率则分别为35.3±5.6、50.0±8.3、57.0±8.5、58.8±2.1(/1 000)。Western blot结果显示，野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.70±0.03)的CCM3表达量是对照组(0.53±0.07)的1.32倍，杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.48±0.02)的CCM3表达量是对照组(0.27±0.04)的1.77倍，缺陷型细胞升高较多，差异有统计学意义(F野生型＝14.77，F杂合型＝25.74，P值均<0.001)；野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.69±0.03)的γ-H2AX表达量是对照组(0.65±0.07)的1.06倍，杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.99±0.04)的CCM3表达量是对照组(0.64±0.06)的1.55倍，差异有统计学意义(F野生型＝7.08，P＝0.012；F杂合型＝13.49，P＝0.002)。
结论CCM3基因可能在铅所致小胚胎成纤维细胞的遗传毒性中发挥作用，在小鼠胚胎成纤维细胞毒性方面，铅暴露与CCM3基因存在交互作用。
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