【摘 要】
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利用桃儿七叶绿体全基因组开发cpSSR引物,使用正交设计试验,对桃儿七cpSSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA,Mg2+,Taq DNA酶,dNTPs及ISSR引物)进行筛选优化来研究桃儿七
【机 构】
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中国环境科学研究院,北京,100012;海南大学热带农林学院,海口,570228
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利用桃儿七叶绿体全基因组开发cpSSR引物,使用正交设计试验,对桃儿七cpSSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA,Mg2+,Taq DNA酶,dNTPs及ISSR引物)进行筛选优化来研究桃儿七遗传多样性.选取甘肃碌曲县则岔石林桃儿七居群样本及13个不同桃儿七居群验证该反应体系.正交试验表明:各因素显著性为Mg2+＞引物＞Taw酶＞DNA浓度＞dNTPs,桃儿七cuss-PCR反应的最佳体系为(25 μL):DNA20 ng/μL,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTPs 2.0 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U,引物1.0 μmol/L,2.5 μL 10×Buffer.该体系具有很高的稳定性和重复性,并为野生桃儿七遗传多样性及保护策略研究提供了技术支持.
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