不同糖浓度下顺铂联合雷帕霉素对子宫内膜癌细胞增殖的体外研究

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangxinyi808
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目的 观察在不同糖浓度下顺铂联合mTOR抑制剂雷帕霉素对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、周期和凋亡的影响,进一步研究Akt/mTOR/S6信号通路相关蛋白表达的改变.方法 模拟人体血糖浓度(高糖浓度组25 mmol/L,正常糖浓度组11 mmol/L)体外培养人EC Ishikawa和HEC-1B细胞.细胞计数盒8(CCK8)法检测2种糖浓度下顺铂联合雷帕霉素对Ishikawa和HEC-1B细胞增殖的作用;流式细胞仪检测对EC细胞周期和凋亡的影响;蛋白质印迹法检测Akt/mTOR/S6信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、S6和p-S6表达情况.结果 将高糖对照组细胞增殖能力设定为1,比较糖浓度和药物处理对EC细胞增殖影响.Ishikawa细胞中F药物=239.592,P<0.001;F葡萄糖浓度=75.447,P<0.001;F药物×葡萄糖浓度=0.674,P=0.580.HEC-1B细胞中F药物=230.125,P<0.001;F葡萄糖浓度=82.087,P<0.001;F药物×葡萄糖浓度=0.583,P=0.634.说明高糖浓度能够促进EC细胞增殖,同时药物联合组较单药能够显著抑制细胞增殖,但二者未表现出交互作用.细胞凋亡率检测结果显示,Ishikawa细胞F药物=3377.325,P<0.001;F葡萄糖浓度=1611.572,P<0.001;F药物×葡萄糖浓度=9.484,P=0.001.HEC-1B细胞F药物=677.858,P<0.001;F葡萄糖浓度=187.717,P<0.001;F药物×葡萄糖浓度=5.182,P=0.011.说明高糖浓度组凋亡率较正常糖浓度组降低,药物联合组细胞凋亡率大于单药组,且二者具有交互作用.顺铂组EC细胞G2/M期比例上升,t=10.350,P<0.001;药物联合组S期细胞比例上升,t=5.288,P=0.002.蛋白质印迹结果显示,药物处理48 h后,在Ishikawa细胞中高糖浓度下Akt(t=13.91,P=0.046)、p-Akt(t=15.31,P=0.041)、S6(t=11.25,P=0.028)和p-S6(t=8.926,P=0.036)表达量较正常糖浓度升高;在HEC-1B细胞中,高糖浓度下Akt(t=20.80,P=0.153)、p-Akt(t=9.074,P=0.349)、S6(t=12.06,P=0.026)和p-S6(t=15.26,P=0.021)表达量较正常糖浓度同样升高.同时在Ishikawa细胞中高糖和正常糖浓度下药物联合组p-Akt(t=20.54,P=0.016;t=63.21,P=0.005)、S6(t=67.09,P=0.004;t=55.13,P=0.006)和p-S6(t=71.64,P=0.004;t=142.40,P=0.002)表达低于对照组;在HEC-1B细胞中高糖和正常糖浓度下药物联合组p-Akt(t=77.61,P=0.004;t=101.80,P=0.003)、S6(t=25.85,P=0.012;t=97.00,P=0.003)和p-S6(t=47.85,P=0.007;t=50.29,P=0.006)表达低于对照组,差异有统计学意义.结论 体外培养条件下,葡萄糖浓度升高可以促进EC细胞增殖能力,降低细胞内凋亡,同时能够上调Akt/mTOR/S6信号通路表达.顺铂与雷帕霉素在体外联合应用可以抑制EC细胞增殖和阻滞细胞于S期,同时降低Akt/mTOR/S6信号通路中相关靶蛋白表达.
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