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研究肿瘤坏死因子(TNF)α在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑内基因转录水平的变化。
方法制备左脑HIBD的新生大鼠模型。利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测新生大鼠HIBD后不同时间海马、皮质TNF-α基因转录水平的表达,经凝胶成像及分析系统扫描RT-PCR扩增产物,以内参照半定量分析TNF-α mRNA的动态变化。系列稀释的总RNA经RT-PCR扩增后行Southern杂交鉴定产物特异性。
结果(1)RT-PCR技术敏感特异,最低可检出100 fg总RNA,RT-PCR扩增产物只能特异地与其相应核酸探针杂交。(2)HIBD后1小时TNF-αmRNA开始增高,其高峰表达时间为HIBD后6小时,5天基本恢复至正常水平,高峰表达时左脑皮质、海马TNF-αmRNA水平分别为正常组的4.3~5.2倍(P<0.01),为右脑的2.5~3.5倍(P < 0.01)。损伤侧海马表达明显高于皮质(P<0.01)。
结论TNF-α在HIBD后早期出现转录,可能在HIBD发病过程中起重要作用。