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以康宁木霉AS3．2774mRNA为模板，通过RT—PCR技术，扩增了1413bp的CBHⅡ全长基因，利用T—A克隆，将CBHⅡ克隆至克隆载体pMD18-TSimpleVector，构建质粒pMD18-T—CBHⅡ。以Sinai和SphI双酶切pMD18-T—CBHⅡ和以胸苷酸合成酶基因fthymidylatesynthase，thyAl为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达栽体pW425t，将纯化的CBHⅡ亚克隆到pW425t中，得到原核表达重组质粒pW425t—CBHⅡ，可在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达。