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【摘 要】目的：比较四个不同产地肋柱花药材中獐芽菜苦苷的含量，为临床药用提供依据；方法：采用高效液相色谱法，测定獐芽菜苦苷的含量；结果：不同产地肋柱花药材中獐芽菜苦苷的含量相差悬殊，从高到低依次为锡林浩特市乌珠穆沁旗>赤峰市赛罕林场>锡林浩特市东乌珠穆沁旗>通辽市扎旗罕山自然保护区；结论：不同产地的肋柱花药材中獐芽菜苦苷的含量有显著的差异。
【关键词】肋柱花；獐芽菜苦苷；HPLC色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0187-02
肋柱花（别名：哈比日根-地格达），蒙古族常用习用药材之一，为龙胆科植物肋柱花Lomatogonimu rotatum （L.）Fries ex Nym的干燥全草。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》（1998版蒙药分册）[1]，具有平息“协日”，清热，健胃，愈伤功能。主要用于“协日”热，瘟疫，流感，伤寒，中暑头痛，肝胆热，黄疸，胃“协日”，伤热等症。至今尚未见肋柱花中獐芽菜苦苷的比较研究报道，本研究运用高效液相色谱法对不同产地的肋柱花药材中獐芽菜苦苷的含量进行了测定和比较，以期对肋柱花药材的临床用药提供依据。
1 仪器与材料
LC-10AT高效液相色谱仪 （日本岛津） ，SPD—10AVP检测器 （日本岛津） ，N3000色谱工作站 （浙江大学智能信息研究所） ， Hypersil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm）大连依利特公司，ADW220D型电子分析天平 （max2208/82g d=0.1mg/0.01mg） （日本岛津） ， KQ-100型超声波清洗器 （昆山市超声波仪器有限公司产品）
肋柱花药材分别由内蒙古锡林浩特市西乌珠穆沁旗蒙医医院提供，批号20101016，为样品1；内蒙古锡林浩特市东乌珠穆沁旗蒙医医院提供，批号20101102，为样品2；採自内蒙古通辽市扎旗罕山林场，批号20100720，为样品3；採自内蒙古赤峰市赛罕林场，批号20100805，为样品4。经内蒙古民族大学蒙医
药学院吴香杰教授鉴定为龙胆科植物肋柱花Lomatogonimu rotatum （L.）Fries ex Nym的干燥全草。獐芽菜苦苷对照品（批号0875-200203）由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯；水为高纯水；所用试剂均为分析纯。
2 试验方法
2.1 色谱条件[2]
色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（25：75）；检测波长：238nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：25℃；进样量：10?l。
2.2 对照品溶液的制备 取獐芽菜苦苷对照品5.2mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取上液各1.0ml，置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含獐芽菜苦苷0.052mg）。
2.3 供试品溶液的制备 取肋柱花约0.2g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系及其工作范围的考察 分别精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0?l，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积（A）。并以峰面积（Y）对獐芽菜苦苷的进样量（X）进行线性回归，得回归方程分别为：y =23651x -8864，r = 0.999 9。结果表明，獐芽菜苦苷在0.125?g～0.75 ?g范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.5 精密度試验 精密吸取供试品溶液10?l，在上述色谱条件下，分别重复进样6次，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果獐芽菜苦苷的RSD值为1.13%。结果表明，精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液10?l，分别于0、2、4、6、8、10小时注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果獐芽菜苦苷的RSD值为0.72%。表明供试品溶液在10小时内测定稳定性良好。
2.7 重复性试验 称取同一批样品约0.2g，共6份，精密称定，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液6份，按含量测定方法，分别精密吸取10?l，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积。结果獐芽菜苦苷的RSD值分别为1.25%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。
2.8 回收率试验 取已知含量的样品约0.1g ，计6份，精密称定，分别加入一定量的獐芽菜苦苷对照品溶液，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液后进样测定峰面积，并计算回收率。结果獐芽菜苦苷的回收率为98.36%，RSD为1.79%。
4 结论
试验考察了甲醇回流提取和超声提取等条件下的提取率，结果提示，回流提取和超声提取对獐牙菜苦苷含量并没有影响，故采用超声提取；考察了以下色谱系统：甲醇-水、甲醇-磷酸-水、乙腈-水、乙腈-磷酸-水，所得到的色谱图以甲醇-磷酸-水（水中含0.1%磷酸）为最佳，故采用以上的该方法；样品测定结果表明，内蒙古锡林浩特市西乌珠穆沁旗蒙医医院提供的肋柱花中獐牙菜苦苷含量最高，具一定的开发前景。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册[S].北京：1998，15.
[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].一部.北京：2010： 192.
【关键词】肋柱花；獐芽菜苦苷；HPLC色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0187-02
肋柱花（别名：哈比日根-地格达），蒙古族常用习用药材之一，为龙胆科植物肋柱花Lomatogonimu rotatum （L.）Fries ex Nym的干燥全草。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》（1998版蒙药分册）[1]，具有平息“协日”，清热，健胃，愈伤功能。主要用于“协日”热，瘟疫，流感，伤寒，中暑头痛，肝胆热，黄疸，胃“协日”，伤热等症。至今尚未见肋柱花中獐芽菜苦苷的比较研究报道，本研究运用高效液相色谱法对不同产地的肋柱花药材中獐芽菜苦苷的含量进行了测定和比较，以期对肋柱花药材的临床用药提供依据。
1 仪器与材料
LC-10AT高效液相色谱仪 （日本岛津） ，SPD—10AVP检测器 （日本岛津） ，N3000色谱工作站 （浙江大学智能信息研究所） ， Hypersil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm）大连依利特公司，ADW220D型电子分析天平 （max2208/82g d=0.1mg/0.01mg） （日本岛津） ， KQ-100型超声波清洗器 （昆山市超声波仪器有限公司产品）
肋柱花药材分别由内蒙古锡林浩特市西乌珠穆沁旗蒙医医院提供，批号20101016，为样品1；内蒙古锡林浩特市东乌珠穆沁旗蒙医医院提供，批号20101102，为样品2；採自内蒙古通辽市扎旗罕山林场，批号20100720，为样品3；採自内蒙古赤峰市赛罕林场，批号20100805，为样品4。经内蒙古民族大学蒙医
药学院吴香杰教授鉴定为龙胆科植物肋柱花Lomatogonimu rotatum （L.）Fries ex Nym的干燥全草。獐芽菜苦苷对照品（批号0875-200203）由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯；水为高纯水；所用试剂均为分析纯。
2 试验方法
2.1 色谱条件[2]
色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（25：75）；检测波长：238nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：25℃；进样量：10?l。
2.2 对照品溶液的制备 取獐芽菜苦苷对照品5.2mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取上液各1.0ml，置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含獐芽菜苦苷0.052mg）。
2.3 供试品溶液的制备 取肋柱花约0.2g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系及其工作范围的考察 分别精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0?l，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积（A）。并以峰面积（Y）对獐芽菜苦苷的进样量（X）进行线性回归，得回归方程分别为：y =23651x -8864，r = 0.999 9。结果表明，獐芽菜苦苷在0.125?g～0.75 ?g范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.5 精密度試验 精密吸取供试品溶液10?l，在上述色谱条件下，分别重复进样6次，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果獐芽菜苦苷的RSD值为1.13%。结果表明，精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液10?l，分别于0、2、4、6、8、10小时注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果獐芽菜苦苷的RSD值为0.72%。表明供试品溶液在10小时内测定稳定性良好。
2.7 重复性试验 称取同一批样品约0.2g，共6份，精密称定，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液6份，按含量测定方法，分别精密吸取10?l，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积。结果獐芽菜苦苷的RSD值分别为1.25%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。
2.8 回收率试验 取已知含量的样品约0.1g ，计6份，精密称定，分别加入一定量的獐芽菜苦苷对照品溶液，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液后进样测定峰面积，并计算回收率。结果獐芽菜苦苷的回收率为98.36%，RSD为1.79%。
4 结论
试验考察了甲醇回流提取和超声提取等条件下的提取率，结果提示，回流提取和超声提取对獐牙菜苦苷含量并没有影响，故采用超声提取；考察了以下色谱系统：甲醇-水、甲醇-磷酸-水、乙腈-水、乙腈-磷酸-水，所得到的色谱图以甲醇-磷酸-水（水中含0.1%磷酸）为最佳，故采用以上的该方法；样品测定结果表明，内蒙古锡林浩特市西乌珠穆沁旗蒙医医院提供的肋柱花中獐牙菜苦苷含量最高，具一定的开发前景。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册[S].北京：1998，15.
[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].一部.北京：2010： 192.