【摘 要】
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目的为了在ｃＤＮＡ文库杂交筛选目的基因过程中，当复筛的杂交信号对应于１个多克隆融合噬菌斑时，能够快速、准确地分离出特异克隆的插入片段。方法依据定量ＰＣＲ扩增的原理，利用初始模板量的不
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目的为了在ｃＤＮＡ文库杂交筛选目的基因过程中，当复筛的杂交信号对应于１个多克隆融合噬菌斑时，能够快速、准确地分离出特异克隆的插入片段。方法依据定量ＰＣＲ扩增的原理，利用初始模板量的不同，通过两次ＰＣＲ反应，鉴定和分离出所需ｃＤＮＡ片段。结果利用这一方法，在β－１，４－半乳糖苷转移酶ｃＤＮＡ的“步移”复筛中，从一个双克隆融合斑中，得到了特异性克隆的插入片段，经测序证实为β－１，４－半乳糖苷转移酶的５′ｃＤＮＡ序列，长１．９ｋｂ，从而完成了全长ｃＤＮＡ的克隆，节省了进行再次复筛的时间和材料。结论该方法简便、快捷，可以显著地节省时间和实验材料，在新基因克隆中有一定的实用价值。
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