【摘 要】
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目的评价RhoA在富氢液减轻脂多糖(LPS)诱发人肠屏障功能障碍中的作用。方法将Caco-2细胞以2×105个/ml的密度接种于transwell小室，每孔400 μl，采用随机数字表法，将其分为5组(n＝50)：对照组(C组)、富氢液组(H2组)、LPS组、LPS＋富氢液组(LPS＋HRS)组和LPS＋RhoA抑制剂C3胞外酶组(LPS＋C3组)。H2组和LPS＋HRS组用含0.6 mmol/L
【机 构】
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300052 天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所,300052 天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所,300052 天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所,300052 天津医
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目的评价RhoA在富氢液减轻脂多糖(LPS)诱发人肠屏障功能障碍中的作用。
方法将Caco-2细胞以2×105个/ml的密度接种于transwell小室，每孔400 μl，采用随机数字表法，将其分为5组(n＝50)：对照组(C组)、富氢液组(H2组)、LPS组、LPS＋富氢液组(LPS＋HRS)组和LPS＋RhoA抑制剂C3胞外酶组(LPS＋C3组)。H2组和LPS＋HRS组用含0.6 mmol/L富氢液的培养基培养，LPS组、LPS＋HRS组和LPS＋C3组加入LPS 100 μg/ml；于加入LPS前1 h时，LPS＋C3组加入C3胞外酶2.5 μg/ml。每组分别于LPS孵育前即刻、3、6、12、24、36、48 h时取5孔，测定上皮细胞电阻(TEER)和渗透系数(PE)，每组于LPS孵育24 h时取5孔，采用Western blot法和免疫荧光法测定occludin与E-cadherin的表达，采用GST pull-down法测定RhoA活性。
结果与C组比较，LPS组、LPS＋HRS组和LPS＋C3组LPS孵育6-48 h时TEER降低，PE和RhoA活性升高，occludin和E-cadherin的表达下调(P<0.05)；H2组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)；与LPS组比较，LPS＋HRS组和LPS＋C3组LPS孵育6-48 h时TEER升高，PE和RhoA活性降低，occludin和E-cadherin的表达上调(P<0.05)；与LPS组比较，LPS＋HRS组和LPS＋C3组occludin和E-cadherin在细胞膜处分布部分增多，在细胞质中分布减少，"铁丝网"样形态的连续性与完整性部分恢复。
结论富氢液可减轻LPS诱发人肠屏障功能障碍，其机制与抑制RhoA激活，从而上调occludin和E-cadherin的表达及抑制其分布紊乱有关。
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