【摘 要】
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目的摸索人胎脑神经干细胞(hNSC)在动物移植研究中理想的示踪检测方法,探讨hNSC移植后的命运,为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据.方法用添加表皮生长因子+碱性成
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目的摸索人胎脑神经干细胞(hNSC)在动物移植研究中理想的示踪检测方法,探讨hNSC移植后的命运,为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据.方法用添加表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子+白血病抑制因子的N2培养基从流产的人胚胎前脑组织培养出神经干细胞球,通过免疫荧光技术检测神经干细胞巢蛋白(Nestin)抗原标志和细胞分化潜能以鉴定其干细胞属性.取体外培养6 d的神经干细胞集落,进行PKH26标记后培养和分化示踪.将培养14 d的神经球移植到缺氧缺血性脑病的新生鼠侧脑室,12只鼠分为PKH26标记示踪组(4只)、免疫反应检测组(4只)和对照组(4只),于移植后第4、7、14 天杀鼠取脑,全脑切片,行抗人细胞核抗体(抗-hNuc)和抗人神经丝抗体(Anti-hNF)的特异性免疫反应检测及PKH26的荧光观察.结果体外培养获得典型人胎脑神经干细胞球.PKH26能高效标记神经干细胞,标记的阳性率＞95%,标记分子可伴随干细胞增殖、迁移和分化,但不进入细胞突起,仅位于胞体.Anti-hNuc免疫荧光检测和PKH26示踪结果显示:植入脑室的hNSC,4 d即可迁移到嗅球、额叶皮层内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内,小脑蒲氏细胞层有单层标记细胞排列,中脑区域也有广泛的标记细胞分布,损伤灶区有明显多的移植细胞分布.抗-hNF检测结果显示:在大脑皮层的颗粒层有阳性反应细胞,彼此间有连接发生.结论可用PKH26对体外培养获得的hNSC进行标记示踪.Anti-hNuc可用于检测移植细胞在受体鼠脑内的分布,抗-hNF可用于检测移植细胞的成神经元分化及神经元间发生的连接.hNSC经脑室途径移植缺氧缺血性损伤的新生大鼠脑,可快速迁移到全脑多处远距离部位,并构建神经元连接,损伤灶区对移植细胞有牵引作用.
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