【摘 要】
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本文建立了一种同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)2种病原的双重纳米RT-PCR方法.采用BVDV 5\'-UTR基因序列(GenBank登录号:AB040132.1)和BCoV的N基因保守序列(GenBank登录号:KX982264.1)设计出一对BVDV特异性引物和一对BCoV的特异性引物,结果表明此方法对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛轮状病毒(BRV)均无交叉反应,特异性良好.同时,应用此方法检测33份
【机 构】
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吉林农业大学中药材学院,吉林长春 130112;中国农业科学院特产研究所,吉林长春 130112
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本文建立了一种同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)2种病原的双重纳米RT-PCR方法.采用BVDV 5\'-UTR基因序列(GenBank登录号:AB040132.1)和BCoV的N基因保守序列(GenBank登录号:KX982264.1)设计出一对BVDV特异性引物和一对BCoV的特异性引物,结果表明此方法对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛轮状病毒(BRV)均无交叉反应,特异性良好.同时,应用此方法检测33份腹泻牛的临床样品和25份腹泻鹿的临床样品,结果得出BVDV、BCoV和2种病原混合感染的牛样品阳性率分别为15.15％、36.36％和6.06％.鹿样品感染BVDV、BCoV和2种病原混合感染的阳性率分别为28％、8％和8％.此外,敏感性试验结果为常规RT-PCR敏感性的10倍,最低检出限为1fg.研究表明,本文建立的该方法快速、灵敏、简捷,具有较强的特异性、敏感性,可适用于大批量临床样品检测,为反刍动物相关病毒性腹泻的诊断和防控提供一定技术支撑.
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