【摘 要】
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目的 掌握小鼠胚胎干细胞(ESCs)向内皮细胞分化方法,为临床心血管疾病治疗研究的发展奠定基础.方法 分化前检测ESCs自我更新标记分子的表达.单层分化4d检测血管内皮生长因子
【机 构】
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兰州大学基础医学院生物化学及分子生物学研究所,复旦大学上海医学院,分子医学教育部重点实验室
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目的 掌握小鼠胚胎干细胞(ESCs)向内皮细胞分化方法,为临床心血管疾病治疗研究的发展奠定基础.方法 分化前检测ESCs自我更新标记分子的表达.单层分化4d检测血管内皮生长因子受体2(Flk1)的表达.分化8d检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达,同时于显微镜和透射电镜下观察分化细胞形态.最后在血管内皮生长因子(VEGF)诱导组分化2、4、6、8、10d检测八聚体结合转录因子4(Oct4)、Flk1和VE-cadherin的表达.结果 分化前自我更新标记分子的表达结果说明E14细胞具有自我更新能力.分化4d表达Flk1,说明E14细胞分化为中胚层前祖细胞;分化8 d VE-cadherin的表达说明E14细胞分化成为血管内皮细胞.分化8d光镜下观察内皮细胞特征性呈“鹅卵石”样结构非常明显;透射电镜下可观察到韦-帕小体(W-P)小体,以上结果说明E14细胞分化成为内皮细胞.最后,对分化用VEGF诱导组分化2、4、6、8、10d的Oct4、Flk1和VE-cadherin表达范围有了掌握.结论 单层分化8d,VE-cadherin的表达说明E14细胞已分化为成熟血管内皮细胞.掌握ESCs向血管内皮细胞定向分化方法为临床心血管疾病治疗研究的发展奠定基础.
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