【摘 要】
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目的 以重组腺病毒(rAd)为载体构建腺病毒-睫状神经营养因子-内部核糖体进入位点-绿色荧光蛋白(Ad-CNTF-IRES-GFP).方法 先构建Psp-CNTF-IRES-GFP质粒,再制备PDC316-CNTF-IRE
【机 构】
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中山大学附属第三医院神经病学科,中山大学附属肿瘤医院实验研究部
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目的 以重组腺病毒(rAd)为载体构建腺病毒-睫状神经营养因子-内部核糖体进入位点-绿色荧光蛋白(Ad-CNTF-IRES-GFP).方法 先构建Psp-CNTF-IRES-GFP质粒,再制备PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒,然后在脂质体的作用下,用构建好的PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒与骨架质粒PBHG在293-LP细胞中构建Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒,并扩增、纯化,鉴定病毒活性.最后,将Ad-CNTF-IRES-GFP转染人源性骨髓间充质细胞(MSCs),观察MSCs的CNTF表达情况.结果 成功扩增CNTF基因,扩增后的CNTF基因与基因文库序列完全相符;成功制备PDC316-CNTF-IRES-GFP质粒及Ad-CNTF-IRES.GFP腺病毒,测得Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒的病毒活性单位(pfu)为2.3x1011;构建好的Ad-CNTF-IRES-GFP成功转染MSCs,而凡转染后的MSCs表达CNTF的量为未转染MSCs表达量的20倍.结论 本方法能够成功构建Ad-CNTF-IRES-GFP腺病毒载体,而且转染后的MSCs高度表达CNTF.
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