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目的：建立k-ras基因突变的焦磷酸测序方法，并分析该基因在结直肠癌中的突变率。方法： 制备10份卫生部临床检验中心2013年全国k-ras基因突变检测室间质评模板DNA，对焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法进行验证；制备230例结直肠癌标本gDNA，应用PyroMark Q24焦磷酸测序仪进行k-ras基因的焦磷酸测序。结果： 建立了k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法，检测正确率100%；230例结直肠癌标本中共检出基因突变型33例，总突变率14.34% （33/230），其中12号密码子上34