探究间充质干细胞(MSC)治疗刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的机制。
方法从3周龄C57BL/6小鼠的四肢致密骨片中体外分离培养MSC并鉴定其表面标记分子和成脂成骨分化能力。将15只6～7周龄C57BL/6小鼠分为对照组、MSC治疗组和PBS治疗组，每组5只。MSC治疗组经尾静脉先后注射ConA和MSC，PBS治疗组经尾静脉先后注射ConA和PBS，对照组先后两次均经尾静脉注射PBS。注射14～16 h后处死小鼠。检测外周血ALT、AST，进行肝脏Knodell评分。流式细胞分析术检测脾脏CD4＋T淋巴细胞活化比例及CD4＋T淋巴细胞中调节性T细胞(Treg)、Th1、Th2和Th17比例变化情况，并计算Th17与Treg比值。ELISA检测外周血TNF–α、IFN–γ及IL–4相关细胞因子的含量。应用独立样本t检验比较两组正态分布资料间的差异。
结果MSC治疗组的ALT、AST及Knodell评分分别为(174.2±46.9) U/L、(185.6±71.6) U/L、(3.4±1.3)分，均优于PBS治疗组[(647.0±118.0) U/L、(749.0±104.0) U/L、(5.2±0.8)分]，差异均有统计学意义(t＝8.33、9.98、2.55，P均<0.05)。PBS治疗组脾脏中CD4＋T淋巴细胞活化比例为(26.10±2.17)%，CD4＋T淋巴细胞中Th1、Th2细胞所占比例为(5.81±0.79)%、(5.98±1.22)%，Th17与Treg比值为0.29±0.03，外周血中TNF–α、IFN–γ和IL–4水平分别为[(1 281.95±88.61) U/L、(1 838.66±196.91) U/L、(1 192.36±163.94) U/L]，较对照组的(13.74±1.59)%、(1.35±0.17)%、(2.13±0.17)%、0.15±0.05、(21.71±2.50) U/L、(11.84±1.28) U/L、(24.46±3.96) U/L均显著升高，差异均有统计学意义(t＝10.26、12.37、7.02、5.30、31.79、15.93、20.75，P均<0.01)。MSC治疗组与PBS治疗组脾脏CD4＋T淋巴细胞活化比例差异无统计学意义[(26.20±3.09)%比(26.10±2.17)%，P>0.05]，但MSC治疗组CD4＋T淋巴细胞中Th1、Th2细胞所占比例[(1.83±0.52)%、(2.75±1.06)%]，Th17与Treg比值(0.18±0.02)及其外周血中TNF–α、IFN–γ及IL–4水平[(760.71±73.19) U/L、(742.49±76.46) U/L、(825.76±101.74) U/L]均较PBS治疗组显著降低，差异均有统计学意义(t＝9.45、4.48、6.41、10.14、5.56、10.22，P均<0.01)。MSC治疗组中Th17与Treg比值与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
结论MSC通过影响脾脏CD4＋T淋巴细胞亚群降低Th1、Th2细胞比例，导致外周血中后者分泌的细胞因子(TNF–α、IFN–γ和IL–4)水平下降；升高Treg比例，降低Th17比例，维持Th17与Treg平衡，进而起到治疗ConA诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的作用。