【摘 要】
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目的:构建inhba基因过表达的慢病毒载体（lenti-EGFP-inhba）,观察体外转染大鼠卵巢颗粒细胞的有效性。方法:p LVX-EGFP-3FLAG质粒系统经EcoRI酶切使之线性化。inhba基因（NM008380
【机 构】
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山东大学附属济南市中心医院妇科; 遂宁市中心医院妇产科;
【基金项目】
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山东省医药卫生科技发展计划(No:2016WS0127)
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目的:构建inhba基因过表达的慢病毒载体（lenti-EGFP-inhba）,观察体外转染大鼠卵巢颗粒细胞的有效性。方法:p LVX-EGFP-3FLAG质粒系统经EcoRI酶切使之线性化。inhba基因（NM008380）PCR扩增后同源重组入线性化的表达质粒系统。Western blot法检测表达质粒目的基因表达。将构建成功的慢病毒载体（lenti-EGFP-inhba）转染大鼠卵巢颗粒细胞（MOI=20）,检测目的基因表达。结果:PCR扩增产物与目的基因大小吻合,重组质粒系统经转化后获得阳性克隆,转染293T细胞可见EGFP-inhba融合蛋白表达。Western blot获得76k Da分子量大小阳性条带,与融合蛋白分子量大小一致。lentiEGFP-inhba体外转染大鼠卵巢颗粒细胞,倒置荧光显微镜下可见EGFP表达。结论:lenti-EGFP-inhba表达载体成功构建,并可在体外有效转染大鼠卵巢颗粒细胞。
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