【摘 要】
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在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克
【机 构】
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上海师范大学生命与环境科学学院,中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室
【基金项目】
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中央级公益性科研院所基本科研业务费项目;
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在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
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