探讨微小RNA(miRNA，miR)-19a通过乳腺癌阿霉素(ADM)耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。
方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体，投射电镜及Nanosight对外泌体进行观察鉴定。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌敏感细胞株GFP-MCF-7/S，通过细胞-细胞及细胞-外泌体共培养实验观察耐药性传递现象。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot及细胞转染技术检测miR-19a及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53(PTEN/Akt/p53)轴在耐药性发生过程中的作用。
结果与MCF-7/S比较，MCF-7/A细胞中miR-19a的表达(1.03±0.16比3.56±0.58，P＝0.002)显著增加，miR-19a抑制剂处理后MCF-7/A细胞对化疗药物ADM的敏感性[(41.17±10.65)%比(23.45±8.89)%，P＝0.011]显著增加。电镜下观察两种乳腺癌细胞分泌的外泌体均呈圆形或椭圆形，直径为40～100 nm。荧光显微镜下对GFP的观察及细胞计数试剂盒(CCK-8)法对细胞增殖抑制率的检测结果显示ADM对MCF-7/S ＋MCF-7/A及MCF-7/S＋ MCF-7/A exos组细胞的增殖抑制率显著低于MCF-7/S＋MCF-7/S[(31.50±6.68)%比(51.20±12.44)%，P＝0.006]及MCF-7/S＋ MCF-7/S exos[(27.67±6.02)%比(49.65±10.52)%，P＝0.000]组细胞，且伴随着细胞miR-19a表达的增加(1.01±0.13比2.67±0.62，P＝0.000)。Western blot检测结果显示外泌体中miR-19a能够通过显著抑制PTEN(1.15±0.18比0.67±0.13，P＝0.000)及p53(0.99±0.18比0.49±0.11，P＝0.005)蛋白的表达，增加Akt的磷酸化水平(1.15±0.18比0.67±0.13，P＝0.000)促进受体细胞耐药的发生。
结论miR-19a可通过外泌体包裹的形式传递乳腺癌细胞间的耐药性，进而通过对PTEN/Akt/p53轴的调控促进受体细胞耐药的发生。