【摘 要】
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目的构建表达生存素(survivin)相关microRNA-494基因的重组腺病毒载体。方法应用生物学软件Targetscan 5.2对microRNA-494基因与survivin mRNA作相关性分析。RT-PCR调取目的
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目的构建表达生存素(survivin)相关microRNA-494基因的重组腺病毒载体。方法应用生物学软件Targetscan 5.2对microRNA-494基因与survivin mRNA作相关性分析。RT-PCR调取目的基因,将其连接线性化后的穿梭质粒载体,联合骨架质粒转染入293细胞后同源重组产生重组腺病毒载体。PCR及测序验证重组质粒,荧光显微镜下观察腺病毒荧光蛋白表达。结果重组腺病毒载体构建成功。结论成功构建了重组腺病毒载体,可用于研究其在前列腺癌PC-3细胞中对survivin基因表达的影响。
Objective To construct a recombinant adenovirus vector expressing the survivin-associated microRNA-494 gene. Methods The correlation between microRNA-494 gene and survivin mRNA was analyzed by using Targetscan 5.2 software. The target gene was transferred by RT-PCR, ligated to the shuttleized plasmid vector after linearization, and the recombinant plasmid was introduced into 293 cells by homologous recombination to generate the recombinant adenovirus vector. The recombinant plasmids were verified by PCR and sequencing. The expression of adenovirus fluorescent protein was observed under fluorescence microscope. Results The recombinant adenovirus vector was constructed successfully. Conclusion The recombinant adenovirus vector was successfully constructed and could be used to study its effect on survivin gene expression in prostate cancer PC-3 cells.
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