研究4价流感疫苗所用病毒株在MDCK细胞中的扩增条件。
方法在6孔细胞培养板中以不同感染复数(multiplicity of infection, MOI)(0.100 0、0.010 0、0.001 0、0.000 1)和对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)-胰蛋白酶(胰酶)浓度(0、2、4、8 μg/ml)进行病毒接种和扩增，感染后72 h收获细胞上清液，检测病毒血凝素效价，确定病毒最佳扩增条件。随后，在搅拌瓶中进行MDCK细胞微载体悬浮培养，研究不同起始细胞接种密度(1.5×105、2.0×105、3.0×105个/ml)和微载体浓度(3、5、10 g/L)对MDCK细胞生长的影响，确定细胞最佳扩增条件。根据确定的最佳扩增条件，在搅拌瓶培养体系中扩增4种病毒。
结果6孔板中4种流感病毒的最佳接种条件分别是，A/Michigan/45/2015(H1N1) pdm09：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度2 μg/ml；A/Hongkong/4801/2014(H3N2)：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml；B/Brisbane/60/2008：MOI 0.001 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml；B/Phuket/3073/2013：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml。在搅拌瓶中以3.0×105个/ml初始细胞密度接种，3 g/L微载体浓度培养，MDCK细胞能够实现较好的扩增，最高密度可达2.1×106个/ml；搅拌瓶悬浮培养，以最佳接种条件接种后，4种病毒的血凝素效价为6.75～8.42 log2血凝素单位/50 μl。
结论通过摸索病毒接种最佳MOI、TPCK-胰酶浓度及优化MDCK细胞微载体悬浮培养条件，能够在MDCK细胞微载体悬浮培养体系中有效扩增4价流感疫苗用病毒株，为后期工艺放大研究奠定基础。