【摘 要】
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以‘新梨7号’梨叶片为材料，探究影响原生质体分离的主要因素，制备高产优质的叶肉原生质体，并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶，0.1%果胶酶，0.4%离析酶，0.5 mol · L-1甘露醇，20 mmol · L-1 KCl，20 mmol · L-1 MES，10 mmol · L-1 CaCl2，1.0 g · L-1 BSA)中酶解12 h，可
【基金项目】
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广东省重点领域研发计划项目（2020B0202010003）； 国家重点研发计划项目（2019YFD1001404-5）； 河北省重点研发计划项目（21326308D-1-4）； 河北省现代农业产业技术体系梨创新团队项目（HBCT2018100202）；
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以‘新梨7号’梨叶片为材料，探究影响原生质体分离的主要因素，制备高产优质的叶肉原生质体，并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶，0.1%果胶酶，0.4%离析酶，0.5 mol · L-1甘露醇，20 mmol · L-1 KCl，20 mmol · L-1 MES，10 mmol · L-1 CaCl2，1.0 g · L-1 BSA)中酶解12 h，可制备出产量为1.09 × 106 protopl · mL-1、活力为90%的原生质体。将1 ～ 2 μg · mL-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40% PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h，可以观察到GFP绿色荧光信号，转化率可达40%。
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